鼠源性抗雄性特性抗原噬菌体fab抗体库的构建与筛选.pdfVIP

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体 库的构建与初步筛选 中文撅要 雄性特异性抗原(male_specificantigc蛙)遁露也髂为雄‘睦特舅牲弱缝织翱客{生Y撬琢 minor Y antigen)，简称H．Y抗原，是一组雄性特异性基因 (maIe，speGmchistocompatibility 别控到等方嚣的硬究中其黍重要静理论帮实践意义。由于撩Y抗源的多壳隆抗体韵特异瞧 不强，丽采用杂交瘸方法制餐单拭(mAb)，操馋繁璞，薅虽mAb瓣效侩不链褥到骥显靛掇 高，给抗H．Y抗体在性别控制方面的应用造成了很大困难，也限制了其应用，丽噬菌体表 面糕示技术为j二述问题的解决提供了可能。 本研究首次采耀噬蓠钵抗体瘁技术铡备强Y抗原的Fab抗体，祠溺掇鼠脾细胞律为抗 原免疫同系雌鼠，构建了表面表达Fab购鼠源性噬蕊体抗体痒，著初步薅选出与雄鼠髀纲悲 特羿性结合的F曲噬菌体克隆。首先，取雄鼠脾细胞免疫6～7周龄雌性c57B“6雌鼠，加 强免疫10天后，通过精子细胞海实验和ELIsA实验检测H—Y抗血清，取免疫效果较好的雌 鼠游缨膣，戳zol法提取细疆慧斑《A，合成eDNA第一条链，耐用筒并弓f物进行PCR反应， 扩增出抗体的Fd基因和全长轻链基因，姆辍链纂因毅重链鞑基因努裂捶入噬蘩体表达载体 Fab段蘩因库，进行蓝自斑筛选，计算转化效率。通过PcR反应和双酶切反应鉴定抗体库的 重维率，轻链、耋链怼段基羧的霆缉率玲为8舒5。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体vcsMl3 超感染，成功构建了鼠源性噬菌髂F8b捷钵摩。经测定，噬慧抟攘体痒豹瘁容帮漓痰分裂为 细菔吸附交替筛选，特异性噬菌体得到有效的富集。从筛选后的噬菌体抗体库感染的 检测鼠源性噬菌体Fab抗体特男性，结果显示鸯9橡能与雄惑黪缨鼹特异毽结合，獒有较好 的雄性特异性。经测序分析，E5克隆的重链、轻链可变区序列分别属于Vl和VxⅣ基因 H 家族。 鞋上缝果表翳：本骈究残功擒建了针对妞清学稔潲弱雄性特异後抗原的鼠源性噬菌体抗 体库，为进一步筛选高亲和力的噬嫠体抗体、提裹基园工程技钵的亲稻力、商效表这可溶缝 随b抗体等研究奠定了坚实的实验基础。 关键诱：噬藩体展示；抗体痒；F痨片段；体矫免疫；H—Y抗豫 FAB DISPLAYLIBRARYOF CONSTRUCTIoN0FPHAGE ANDTHESCREENING0F ANTlBODIESREPERTOIES ANTl，MoUSEMALESPEClFICANTIGEN A器STRACT is definedaSamaleminor Y Male．speci_Eican廿genusu枷y mstocmpatibilhyanti鐾en，which a of辆趣e 雌scon蠡潮ed anlig鼹is byEi吐谳d遮1955．M蠢e．辨ec毽egroH≯ofp羚dHetsspeci will assistallceto t圭le ofmaletissue 鼯nes．Itprovide smdyreiection gmRby诧m出erecipiems姐d sexiletermmation．Because areshOrtof the of antibodies