小麦mlo蛋白l2抗体的制备以及mlo蛋白细胞定位的特异性分析.pdfVIP

浙江大学硕士掌位论Jr． 摘 要 大麦Mlo基因的隐性突变(mlo)可以使大麦获得对几乎所有已知大麦白粉 病菌(Blumeria 一般的抗病基因所介导的小种专化性抗性，mlo基因不会引起被侵染细胞的过敏 性坏死反应，而是利用乳突抗性机制来抵抗病原菌的侵入。本研究利用分子生物 学和免疫学的方法制备了小麦Mlo蛋白胞质内第2环多肽的多克隆抗体；利用 免疫细胞化学的方法从超微结构的水平上研究了寄主与病原菌互作过程中Mlo 蛋白的细胞定位，并进行了特异性分析。获得了以下主要结果： 1．根据小麦TaMl03eDNA序列，将编码小麦Mlo蛋白胞质内第2环多肽的 家兔制各了该融合蛋白的多克隆抗体。间接ELISA法测定所制备的抗血清效价 达到l：10000，Westernblot检测表明该抗血清与其纯化的表达蛋白特异性结合。 2．利用小麦Mlo蛋白的2种抗血清(分别由胞质内第2环多肽片段和羧基 末端多肽片段制备)分别对小麦、烟草和不同感瘸性大麦品种的叶片进行了免疫 金标记。结果表明在健康的植物表皮细胞中没有检测到Mlo蛋白抗血清的特异 性结合位点，而在感病的大麦和小麦表皮细胞内的吸器外基质中有特晃性的Mlo 蛋白标记位点。这说明M