双抗体夹心elsa检测prrsv抗原的研究.pdf

中国农业大学硕士论文 中文摘要 本研究依据PRRS病毒核衣壳蛋白(N蛋白)的理化特点，建立了一种可以从基因工 程重组菌pBV—N／DH5a菌体中得到高纯度重组N蛋白的纯化方法，并以纯化后的重组N蛋 白作为免疫原制各出兔抗重组N蛋白的多克隆抗体。I同时将分泌PRRS病毒N蛋白单抗的杂 交瘤细胞株GE3经腹腔接种BALB／c小鼠，收获和纯化腹水，制备出抗N蛋白的单克隆抗体。 利用抗N蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体建立了捕获PRRS病毒抗原的双抗体夹心 p 条件：单抗最适包被浓度为5 g／ml，待检血清无需稀释，多抗最适浓度为1：400稀释， HRP一羊抗兔IgG的最适工作浓度为1：8000稀释；最佳封闭液为1％的明胶，最适抗体稀 释液为5％马血清；单抗最适包被条件为37。C1小时加4C过夜，待检样品和多抗的反应时 间均为37C1小时，酶标二抗反应时间为37C30分钟，底物37C显色15分钟。采用上述 最佳工作条件初步确定结果判定中阴阳性临界值为0．1。 通过最低检出量试验、阻断试验、交叉试验、重复性试验对所建立的DAS—ELISA方法 进行评价，结果