嗜温气单胞菌外蛋白型及其免疫保护性的研究.pdf

摘要 应用动物实验、SDS．PAGE电泳和免疫印迹等方法对8株嗜温气 的致病性、外膜蛋白型及其免疫保护性进行研究。 首：先，将这8株细菌人工感染健康小鼠、鲫鱼和鳖。结果表明嗜 水气单胞菌BA6株为非致病株，其余7株嗜温气单胞菌为致病株，但 细菌的毒力大小在不同表型种间和不同菌株间都存在差异。 分别用超声波法、超声波加EP(EDTA和PMSF)法、研磨法和 研磨加EP法四种不同方法提取了嗜水气单胞菌BA3株的外膜蛋白。 SDS—PAGE电泳结果表明，超声波加EP法提取的外膜蛋白浓度最大， 蛋白条带最清晰。进一步采用超声波加EP法提取了9株嗜温气单胞 株)和J．1(标准株)的外膜蛋白，并对其SDS．PAGE电泳图谱进行 BA6)的OMP型相似。这些表明了不同表型种嗜温气单胞菌的OMP 型存在一定的差异，而同一表型种的不同菌株间的OMP型尽管相似， 但蛋白带的迁移率及颜色深浅却仍有差异。 采用免疫印迹技术对具有代表性的四株嗜温气单胞菌的外膜蛋 白的抗原性进行了分析，结果表明相对分子量为40000的外膜蛋白是 000、50000、38 000 这四株细菌共同的抗原，而分二F量为43 000和50 的蛋白分子分别为嗜温气单胞菌J一1、BA3、BAl5和XA23四株菌所 特有的外膜蛋白抗原。 用标准株J—l的外膜蛋白免疫小鼠(50p g／只)，二免10天后分 别用J—l，BA3，BAl5和XA23四株细菌攻毒。结果表明嗜温气单胞 菌的外膜蛋白具有免疫保护性，能使小鼠抵御同种和不同表型种嗜温 气单胞菌的攻击。这为研制气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗提供了理论 依据。 关键词：嗜温气单腱菌 外膜蛋白型免疫保护性 Abstract The andOutermembrane of8 pathogenicity protein(OMP)properties studied strainsof Aeromc·haswere tests， Mesophilic bychallenge andwesternblot． SDS—PAGE，Dot-ELISA andturtleswere these8 strains． First，mice，carps challengedby Aeromonas BA6W3Sidentifiedasa hydrophila nonpathogenicagent， whiletheotherseven andXA23)were wouldbedifferencein pathogenic．However,there virulencethestrainsofthesameordifferent among species． OMPsofAeromonas BA3wereextracted Second，the hydrophila with ultrasonic fi)ur ways，namely break，ultrasonic—EP experimental and breakandabrasive