喹赛多对猪肝胰素样生长因子-1和表皮生长因子mrna表达的影响研究.pdfVIP

课题名称：喹赛多促进猪生长的内分泌药理学研究 来源：国家自然科学基金 编号 实验室名称：农业部食品安全评价重点开放实验室：农业部兽药残留检测基准实 室：华中农业大学兽医研究所 唆整圭挝獠赶塍盘爨搓生篮圈王：l塑巍应篁筮圆王m酬△蠢达的彪喧班斌 喹赛多对猪肝胰岛素祥生长因子．I和表皮 生长因子mRNA表达的影晌研究 研究生：王謇永 导舞：袁寒辉教授 (农业部食品安全评价重点开放实验璧；农业部兽药残留检测基准实验 室；华中农馥大学薯药研究所中国武汉430070) 揍要 喹赛多为喹喔啉类抗菌促生长新药，对猪、牛、鸡等有明显的促生长作用，但 目前对其促生长机制还不清楚。本文运用相对定量RT-PCR方法，研究喹赛多对原 growth 代培养猪肝细胞以及仔猪肝脏组织中胰岛素样生长因子一1(Insulin—like factor-1，IGF一1)和表皮生长因子(Epidermalgrowth 响，探讨喹赛多抗菌促生长的机理。 猪肝细胞的原代培养采用se西ell建立的两步灌注酶消化法并稍加改进(Seglen， 1976)。将分离的猪肝细胞按5×105／孔接种于24孔培养板，每孔加培养液900J_tL， 放入37℃5％二氧化碳培养箱中培养，待细胞80％汇合后，分别加入PBSl00此、 细胞总RNA。将以上总RNA进行反转录PCR。反转录产物用l％琼脂糖凝胶分离 后，用SYNGENE凝胶成像系统分析目的条带的相对灰度值。以上各组均取3孔做 细胞计数，观察药物对细胞增殖情况的影响。结果表明，喹赛多按200ng／mL添加 于原代培养猪肝细胞中可显著提高其IGF．1mRNA表达(尸o．05)，而该浓度喹赛多 对EGF mRNA和EGF mRNA表达均有显著影响(Pn∞)，但二剂量组间均无显著性差异 mRNA表达(P0．05)，而此时对IGF．1 mRNA表达无显著影响(尸O．05)：12h，24h， 48h均可显著提高IGF一1mRNA和EGF mRNA的表达(P0．05)。细胞计数的结果 表明，喹赛多对肝细胞的增殖无明显影响。 垡虫盛些盘堂熊±堂焦避童 动物试验采用9头去势长大公猪，体萤10．肚2．0kg，随机分成3组，每组3头。 按美国NRC营养栎准1998)镯券。空白对照组每天饲暖空自料，生长激素对照缝 取囊盎采食。试验麓为i0炎，最籀一天用嚣4h螽藩宰采样，群晶立郎放渡氦速冻 mRNA 后转到，70℃冰箱保存备用．用相对定量RTPCR分析肝脏中EGF和IGF*1 的表达量。壤赛多辨饲料臻加砉珏形式绘药仔猪，可显著提离其体增羹(p(o。05)，量 mRNA的表达(P《o．05)。 可显著提高其肝脏缎织中EOF和IGF，1 结论：赡赛多促生长机理可能蔻通过提商动物体内IGF．1和EGF等生长因子的 转录而发挥作用。本文初步建立了用分子生物学技术来研究喹赛多抗菌促生长作用 与动物体内生长相关多肤粪生长因予的表遮谣控之间的关茉，为避一步探讨抗菌健 生长剂的健生长机理，开发新产品，打下了一定的熬础。 关键词：喹赛多，猪，IGF．I，EGF，mRNA表达，相对定蠛RT-PCR 2 哇整垒过猹艇速岛蠢搓生选霸王：!．昶懑麈生丝麟王坠8烈△枣达酸挺喧迎巍 Efiectsof onmRNA ofInsulin．Like Cyadox Expression and GrowthFactorin Liver GrowthFactor-1 Epidermal