eb病毒潜伏性蛋白-1羧基末端活化区-3在鼻咽上皮细胞转化中的作用及机制.pdf

亟±堂建论塞 生奎垴至 EB病毒潜伏性膜蛋白．1羧基末端活化区-3 在鼻咽上皮细胞转化中的作用及机制 中文摘要 EB病毒(Epstein-Barr 病毒，也是最早被识别的人类肿瘤病毒。EBV与许多人类肿瘤如伯基特淋 巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌和肺癌等的病因以及与部分肿瘤的 membrane 转移密切相关。EBV潜伏性膜蛋白l(1atent 1，LMPl)基 protein 因以其单独能促进啮齿类纤维细胞(如Ratl和Balb／C3T3)和部分永生化上 皮细胞恶性转化的特性而被公认为是EB病毒唯一的癌基因。 组成的60～66KD的完整磷酸化跨膜糖蛋白，包括亲水性氨基端胞浆区(1～ 386aa)三种结构域，其中羧基末端胞浆区是活化受体转导胞内信号转化， terminalactivation 发挥致瘤作用的主要部位，包括3个活化区域(earboxy Kitlase 3)，继而进一步激活信息传递与转录 出CTAR3能活化JArJ(Janus transducerandactivator 活化因子(signal 相关恶性肿瘤发生发展规律，本课题主要从以下几个方面展开研究： zx232-351 启动子序列的荧光素酶表达质粒共转染293细胞，单光子检测仪测定比较 二者活化不同转录因子的功能。结果发现：LMPlwr明显呈浓度依赖性上调 重要活性部位。 亟主芏位i金奎 生塞摘要 2、LMPl△232051转化的鼻咽上皮细胞(NP69)生物学特性分析 G418筛选2周后 pLNSX空载体为对照)导入PA317包装细胞，600mg／L 扩大培养，自细胞培养上清获得后续实验所需的感染性逆病毒RV-LNSX、 胞NP69，400mg／L NP69-LMPlwr和NP69一LMPl△23”513种转化细胞系。分别观察和检测这些 转化细胞的形态、生长曲线、平板克隆、软琼脂生长能力和抗凋亡能力。 在培养过程中，逐渐由扁平、鹅卵石样典型上皮形态逐渐演变成细胞间接 触减少的长梭状纤维细胞样形态；(2)与NP69．LMPlwl。细胞相比， VS 落较野生型减少(256+14 VS14．13+1．98，PO．05)。 胞较NP69一LMPlwT细胞的凋亡率为45．34_+2．72 以上结果提示CTAR3参与了LMPl促细胞增殖、转化和抑制凋亡等信号过 程，是LMPl羧基末端重要的转化效应位点之一。 3、LMPl△23”卯转化的鼻咽上皮细胞(NP69)蛋白质组学研究 2351在细胞中表达上调的蛋白质点26个，下调的蛋白质点33个。应用基质 之间所鉴定的蛋白有参与代谢相关的酶类蛋白柠檬酸合酶；参与信号传导 通路的膜联蛋白A2以及参与转录和翻译的相关蛋白延长因子1等，更多的是 与细胞恶性程度相关及促细胞转移相关的一些结构蛋白，如波形蛋白、核 细胞之间鉴定的蛋白有参与代谢相关的酶类蛋白如磷酸丙糖异构酶、异柠 檬酸脱氢酶；参与信号传导通路的G蛋白：参与转录和翻译相关蛋白如核糖 体蛋白PO、非均一型核糖核蛋白～B／H等。为证实比较蛋白质组学研究结果， 亟：￡堂位i金奎 虫塞摘要 采用Re