人精子携带的HBs与HBc基因在早期胚胎细胞中的复制和蛋白表达.pdf

人精子携带的HBs 和HBc 基因在早期胚胎 细胞中的复制与蛋白表达 Protein Expression of Human Spermatozoa-Mediated HBs and HBc Genes in Early Embryonic Cells 姓 名： 张秋菊 导 师： 黄天华 研究员 专业名称： 医学遗传学 研究方向： 生殖遗传学 入学时间：2005 年 9 月 答辩时间：2008 年 6 月 申请学位：理学硕士 2008.6 目 录 目录……………………………………………………………………………………… Ⅰ 中文摘要………………………………………………………………………………… Ⅱ 英文摘要…………………………………………………………………………………Ⅳ 主要缩略语中英文对照表………………………………………………………………Ⅵ 前言…………………………………………………………………………………………1 技术路线…………………………………………………………………………………5 材料与方法…………………………………………………………………………………6 1 材料……………………………………………………………………………….………6 2 方法……………………………………………………………….……………………7 2.1 样本收集和实验动物处理………………………………………….….……………7 2.2 质粒和探针制备……………………………………………………………………10 2.3 实验程序………………………………………………………………….…………14 实验结果…………………………………………………………………………………18 讨论………………………………………………………………………………. ……23 全文小结…………………………………………………………………………………26 参考文献…………………………………………………………………………………27 综述………………………………………………………………………………………31 附录：主要混合液及培养基………………………………………………………………37 致谢………………………………………………………………………………………41 个人简历…………………………………………………………………………………42 I 中文摘要 【背景与目的】 乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病。由于该病流行面广，危害 性大，因此其传播途径的研究一直是各国政府和科学家们高度重视的课题。1985年 Hadchouel等提出“ 乙肝病毒有可能通过生殖细胞垂直传播” 的假设。但由于没有合适的 动物模型和细胞培养系统，10多年过去了没有人能证实这个假设。理论上，用乙肝患 者的精子与正常人卵母细胞受精，研究从精子、受精到胚胎发育各阶段中HBV基因的 行为是最理想的途径，但这条途径既存在法律、伦理问题，也存在获取人卵母细胞的 困难。2002年，黄建民等引入了在生殖医学领域中广泛用于检测人精子受精能力的异 种体外受精实验系统，应用荧光原位杂交技术（FISH ）首次提供了HBV DNA在人精 子染色体上整合的直接证据，证实了携带HBV 基因的人精子在受精时不会受到选择 性淘汰，能够与卵母细胞正常地完成受精过程。继后，Ali等应用同样的异种体外受精 实验系统，获得2-细胞胚胎，用FISH技术证实了整合在人精子基因组中的HBx基因进 入受精卵后，能随胚胎细胞分裂而复制；用RT-PCR技术证实了由人精子携带的HBx 、 HBs和HBc基因能够在胚胎细胞中转录。但是人精子携带的乙肝病毒基因在胚胎