人cd59活性点短肽封条的抗肿瘤效应的研究.pdfVIP

中文摘要 位点短肽 效应 的研究‘ 人0D59活性 封／猪黼降 中文摘要 目的本研究旨在通过噬菌体展示技术寻找与肿瘤逃逸相关的CB59活性位点， 研制特异性针对CD59活性位点的短肽封条．观测其封闭或干扰效应，为肿瘤的靶向 免疫治疗开辟一条新途径。 方法采用噬菌体随机十二肽库展示技术对Hela细胞裂解蛋白及层析纯化后的 ClIO细胞的裂解蛋白进行5轮亲和淘洗筛选；从筛选后的噬菌体库中分别随机挑选 15／16个噬菌体克隆进行测序．并对随机挑选的噬菌体克隆与野生型M13噬茵体进 行竞争结合实验；经序列分析找出共享序列并推断其相应的氨基酸位点，同时与CD59 活性区域进行分析比对，找出人CD59分子的活性位点，并合成短肽封条，观测其封 闭效应。 结果经过5轮全细胞筛选后，两种噬菌体库的回收量均可达到10’～loI数量 级，且竞争结合分析及细胞特异性结合分析显示筛选后的噬菌体克隆及噬菌体库对 两种细胞蛋白均具有明显的特异性结合效应。通过测序结果推断出ttela细胞表面 一．—^c时删Ⅱ上一)，并利用高同源性的Hel8细胞的CD59短肽序列为模型合成高 特异性的短肽封条。 结论利用噬菌体肽库对两种细胞进行全细胞蛋白筛选得到了与CD59特异性结 合的短肽序列，该短肽序列可能是位于肿瘤细胞表面CD59的配体蛋白。经活性检测 证实该短肽封条对人CD59有明显的封闭作用。 硕士研究生： 崔林林(免疫学专业) 研究生导师： 高美华 教授 关键词噬菌体展示；全细胞筛选；CD59蛋白；肿瘤逃逸；短肽封 条；活性位点筛选： ·本课题为国家自然科学基金项目(No 英文摘要 ne ofthe effectoftheactivesite study antineolplastic of ofCD59ontumor short-peptideclamp escaping Abstract searchforthe Objective：Thistopicistoofshort squence tohmanCD59anda can whichbidewithCD59 short-peptidc clamp spccificitity,We wanttousethis toblockogtroublethe of m shortTeptideclamp expfessCD59,it provide abaseofimmunotherapyofrumor． the ofcell Helacellsand protein of theCHOcells Methods：Taking disruption protein cells．afive-round byion-exchangc