人结直肠腺癌预和早期筛查的甲基化分子标志物的研究.pdf

目 录 人结直肠腺癌预警和早期筛查的 DNA 甲基化分子标志物的 1 研究……………………………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言……………………………………………………………6 1.4 材料与方法……………………………………………………9 1.5 结果……………………………………………………………23 1.6 讨论……………………………………………………………30 1.7 结论……………………………………………………………37 1.8 参考文献………………………………………………………38 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………46 2 致谢……………………………………………………………47 RASSF1A 基因与结直肠癌关系的研究进展 （综述） 3 …………………………………………………………………48 1 人结直肠腺癌预警和早期筛查的DNA 甲基化分子标志物的研究 摘 要 目的：研究表明抑癌基因启动子区CpG 岛的甲基化导致抑癌基因表达 失活是导致肿瘤发生的机制之一。本实验旨在通过研究结直肠腺癌、腺瘤 患者及正常人中P 16 基因和Ras 相关结构域家族 1A （RASSF1A ）基因的 启动子区的甲基化状态，并探讨其临床病理意义，为临床应用这些指标预 警、早期筛查结直肠腺癌及预测预后积累可靠资料。方法：收集结直肠腺 癌、腺瘤患者及正常人外周血标本，采用酚-氯仿法提取样本 DNA ，然后 用巢式甲基化特异性PCR 的方法检测P 16 基因和RASSF1A 基因的启动子 区的甲基化状态，并探讨其与临床病理参数的相关性。结果：1、结直肠腺 癌组、腺瘤组、正常组外周血标本中P 16 基因启动子区甲基化阳性率分别 是 45.45%(15/33) 、34.48%(10/29) 、12.5%(3/24) ，差异有统计学意义 2 （χ =6.746 ，P ＜0.05 ）；结直肠腺癌组、结直肠腺瘤组、正常组RASSF1A 基因启动子区甲基化阳性率分别是27.27% （9/33 ）、24.14% （7/29 ）、0%， 2 差异有统计学意义（χ =7.709 ，P ＜0.05 ）。但是两基因启动子区甲基化阳性 2 2 率在腺癌组与腺瘤组间差异无统计学意义（χ =0.772 ，P ＞0.05 ；χ =0.079 ， P ＞0.05 ）。2 、结直肠腺癌组外周血标本中P 16 基因启动子区甲基化阳性率 在高、中、低分化组中分别是 27.14% 、56.25%、100%，显示高、中分化 2 组明显低于低分化组，差异有统计学意义（χ =7.622 ，P ＜0.05 ）；结直肠腺 癌组外周血标本中 RASSF1A 基因启动子区甲基化阳性率在高、中、低分 化组中分别为14.29%、25% 、100%，显示高、中分化组明显低于低分化组， 2 2 差异有统计学意义（χ =9.232 ，P ＜0.01 ）。结直肠腺癌组外周血标本中P 16 基因、RASSF1A 基因启动子区甲基化阳性率在不同性别、年龄、浸润深度、 淋巴结转移、Dukes 分期间无统计学意义(P ＞0.05) ；腺瘤组外周血标本中 P 16 基因、RASSF1A 基因启动子区甲基化阳性率与性别、年龄等因素无相 关性(P ＞0.05) 。3、P 16 与RASSF1A 两基因启动子区甲基化状态无相关性 (P ＞0.05) 。结论：1、P 16 基因与RASSF1A 基因在结直肠