小鼠皮肤切创愈过程中mlt;,3gt;型胆碱能受体表达及其与损伤时间相关性的研究.pdf

I I IIII I IIIII III lUl III ＼1 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要…………………．：………………………………………………．3 二、英文缩略语………………………………………………………………………6 三、论文 —▲￡·．jL_ 刖看………………………………………………………………………………7 实验材料与方法…………………………………………………………………8 实验结果(附论文照片)………………………………………………………12 讨论………………………………………………………………………………20 结论………………………………………………………………………………22 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………23 五、参考文献…………………………………………………………………………24 六、附录 综述………………………………………………………………………………26 在学期间科研成绩………………………………………………………………43 致谢………………………………………………………………………………44 个人简介…………………………………………………………………………45 目 的 皮肤损伤愈合是一个复杂的过程，包括血液成分凝集、炎症反应、肉芽组织 形成、新生上皮覆盖、结缔组织收缩和纤维化等过程。迷走神经递质乙酰胆碱可 被非神经细胞(如角质形成细胞、内皮细胞、黑色素细胞等)合成并通过自分泌、 旁分泌及内分泌等方式参与皮肤的许多基本功能，如增殖、分化、粘附和迁移， 微循环，血管发生及许多免疫反应。实验表明，参与皮肤损伤愈合的中性粒细胞、 单核巨噬细胞、成纤维细胞、角质形成细胞及内皮细胞等均发现非神经胆碱能系 ofmuscarinic 统或其组成成分。M3R(M3subtypes receptor)是毒蕈碱乙酰胆碱受 体的一个亚型，以往的研究表明M3R参与炎症反应和组织器官纤维化等。本研究 应用免疫组织化学和Westernblot技术，检测小鼠皮肤切创后损伤区及周边区各时 间段M3R的表达情况，探讨M3R在皮肤损伤愈合中的作用及其在损伤时间推断 上应用的可能性。 实验材料与方法 健康成年清洁级昆明小鼠50只，雌雄不限，体重35409，随机分为10组。 其中9组为皮肤切创组，另一组为正常对照组，每组均为5只小鼠。乙醚气体吸 入麻醉，背部剪毛处理后，常规手术消毒，在背部中央做一纵行长!．5clla皮肤全 鼠麻醉后脱颈椎处死，取伤口处1．5cmxl．0era皮肤组织；正常对照组小鼠麻醉后 背部剪毛，不做切创，观察14d，脱颈椎处死，取相同部位同等大小皮肤。以各 HE染色、免疫组织化学染色和Westernblot检测应用。应用免疫组织化学和Western blot技术检测50只小鼠皮肤切创后各时间段M3R变化情况。在显微镜x400倍下， 于损伤区及损伤周边区随机选取10个视野，计细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞 率。应用Scion image软件检测各时间段的平均光密度值，测得数据用均数4-标准 差(冤±s)表示。用SPSSl3．0forWindows进行单因素方差分析，以P0．05为 差异有统计学意义。 结果 正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌层中均表达M3R。皮肤切 创伤后6h，可见少数多形核粒细胞有M3R表达；伤后12～24h，大量的多形核粒 细胞和部分单个核细胞M3R呈阳性；伤后1~3d随着时间的延长，M3R阳性细胞 主要以单个核细胞为主；伤后5