羟基积雪草苷对LPS诱导小胶质细胞增殖的抑制作用及机制研究.pdfVIP

· 428 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2015，31(3)：428-434 [文章编号] 1000—4718(2015)03—0428．07 羟基积雪草苷对 LPS诱导小胶质细胞 增殖的抑制作用及机制研究 张思思， 蔡江晖， 万敬员， 刘海林， 刘颖菊 (重庆医科大学药理教研室，重庆市生物化学与分子药理学重点实验室 重庆400016) [摘 要] 目的：研究羟基积雪草苷对LPS刺激的小胶质细胞增殖的抑制作用及机制。方法：取sD大鼠的 新生小鼠，进行小胶质细胞的原代培养 ，分离纯化小胶质细胞 ；MTT法筛选 LPS刺激小胶质细胞增殖的最佳浓度， 观察不同浓度羟基积雪草苷对 LPS刺激小胶质细胞后的作用。ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子仅(TNF- 仅)、白细胞介素 1p(IL一1B)的含量 ，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡，Westernblotting法检测Toll样受体4 (TLR4)蛋白的表达，RT—PCR检测NF．KBmRNA的表达。结果：LPS可以明显诱导体外培养小胶质细胞的增殖和 炎症因子释放。与LPS组比较，羟基积雪草苷对 LPS诱导的小胶质细胞增殖具有显著抑制作用，且具有剂量依赖 性 ，羟基积雪草苷处理小胶质细胞48h的IC。为 10．97nmol／L。同时羟基积雪草苷使小胶质细胞TNF一0【和 IL-6的 释放显著降低 (P0．05)；羟基积雪草苷使小胶质细胞的G，期细胞与细胞凋亡率增加 ，并降低小胶质细胞TLR4 和NF—KB的表达。结论：羟基积雪草苷对 LPS刺激的小胶质细胞的增殖和炎症因子的生成具有抑制作用 ，其作用 机制可能与抑制TLR-4和NF—KB表达、改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。 [关键词] 羟基积雪草苷 ；脂多糖；小胶质细胞 ；细胞周期；细胞凋亡 ；Toll样受体4；核因子 KB [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2015．03．008 InhibitoryeffectofmadecassosideonLPS-stimulatedmicroglia ZHANGSi-si，CAIJiang—hui，WANJing·yuan，LIUHai—lin，LIUYing-ju (DepartmentofPharmacology，ChongqingKeyLaboratoryofBiochemistryandMolecularPharmacology，ChongqingMedi— calUniversity，Chongqing400016，China．E—mail：2553407160@qq．eom) [ABSTRACT] AIM：ToobservetheinhibitoryeffectofmadecassosideontheLPS—stimulatedmicrogliaandtoinves— tigateitspossiblemechanism．METHODS：MierogliacellsofneonatalSprague—Dawley(SD)ratswerecultured，isolated andpurified．Microgliacellswereactivatedwithlipopolysaeeharide(LPS)．Theinhibitoryeffectofmadecassosideonmicro— giiawasmeasuredbyMTrassay．Tumorneerosisfactoralpha(TNF-0)【，interleukin1B(IL一1p)weredetectedbyELISA． Cellcycleandapoptoticratewereevaluatedbyflow eytometry．TheexpressionofTLR4wasdetectedbyWesternblotting． TheexpressionofNF·KBwasdetectedbyRT—PCR．RESULTS：LPSinducedtheprolif