par-2基因默对食管癌ec109细胞增殖及侵袭转移的影响.pdf

HIIIIIIIIIIII 目 录 IIIIIMUlIIItl 1 Y239783 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文PA融2基因沉默对食管癌ECl09细胞增殖及侵袭转移的影响 日IJ吾……………………………………………………………………．．8 前言…………………………………………………………………一…8 材料与方法……………………………………………………………．9 结果……………………………………………………………………22 附图……………………………………………………………………25 附表…………………………………………………………………32 讨论……………………………………………………………………33 结论……………………………………………………………………36 参考文献………………………………………………………………36 综述蛋白酶激活受体．2及RNA干扰技术在食管癌中的作用研究进展41 致谢…………………………………………………………………………51 个人简历…………………………………………………………………一52 中文摘要 PAR一2基因沉默对食管癌ECl 09细胞增殖及侵袭转移的影响 摘 要 目的：食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国是食管癌高发 区。食管癌早期缺乏特异临床表现，大部分食管癌患者就诊时已经属于晚 期，近年来虽然手术及放射、化学疗法在食管癌治疗方面取得了一定的进 步，但是5年总体生存率仍然低于20％。食管癌细胞增殖、转移是影响 患者疗效和预后的重要因素，也是当前食管癌研究中最重要的一个方面。 蛋白酶激活受体．2(Proteinase-actived2，PAR-2)属于细胞膜表 receptors 面受体，是与G蛋白相耦联的蛋白酶激活受体超家族成员，胰蛋白酶、 类胰蛋白酶、凝血因子等是该受体的天然激动剂，PAR．2受激活后可引起 一系列关于肿瘤侵袭、转移、增殖生长等方面的生物学行为。我们的前期 通过与靶mRNA特异性互补配对，引起靶mRNA降解或抑制其翻译，从 而使靶基因表达抑制。RNA干扰因其对靶基因的沉默具有高度的特异性 和强大的抑制作用，正越来越多地应用于多种疾病的预防和治疗研究。本 ECl09细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。 两条特异性寡核苷酸序列，分别插入pGFP：V-R$’质粒载体中构建两个 shRNA．1、PAR-2 shRNA表达质粒(PAR-2 shRNA．2)，经过鉴定，然后将 表达质粒转染至食管癌细胞ECl09中，经嘌呤霉素筛选，获得稳定干扰 的细胞株，运用RT-PCR和Westem Blot法检测PAR．2的表达，从而筛选 出最佳干扰序列的稳定细胞株PAR．2 shRNA 胞术法检测PAR-2 ECl09细胞增殖能力及细胞周期的变化； 结果： 中文摘要 1构建PAR-2基因靶向shRNA表达质粒并测序鉴定 shRNA．1、PAR-2 示重组质粒PAR-2 核苷酸序列比较完全一致。 2通过RNAi技术成功筛选出了PAR-2基因表达下调的食管癌PAR-2 shRNA ECl09稳定细胞株 2．1重组质粒转染ECl09细胞的RT-PCR结果显示PAR-2 shRNA-2组、非特异性序列转染组和空白对照组，四组吸光度的比值分别 为0．35i-0．03、0．4