大肠癌中igf的印迹丢失与淋巴结转移的关系.pdfVIP

·中文论著摘要· 大肠癌中IGF2的印迹丢失与淋巴结转移的关系 目 的 采用逆转录．聚合酶链反应．限制性片段长度多态性(RT．PCR．IULP)方法， 研究大肠癌中IGF2基因印迹状态的改变，分析印迹基因IGF2的印迹丢失与大肠 癌的关系，探讨IGF2的印迹丢失在大肠癌发生发展中的印迹调控机制，并探讨其 与大肠癌生物学行为的关系。 方 法 一、实验材料 实验标本：收集56例人原发性大肠癌患者原发灶和癌旁组织标本。 二、实验方法 1．组织DNA／RNA提取和鉴定 光光度法测定A260／A ／异丙醇／乙醇提取RNA。 2．筛选杂合子标本 I多态酶切位点，只有当标本的基因型为杂合状 IGF2第九外显子内有一Apa 态时，才能为区分两条等位基因的表达产物提供信息。IGF2引物序列上游P2： PCR反 退火温度54℃，产物片段为292bp，由上海生工公司代为合成。在20I．tl buffer dNTP 应体系中，含10xPCR2pl，50mMMgCl211．1，10raM0．4I．tl，109M引物 141,1，TaqE0．21,1，DNA 1．61．1，ddH20 30s_54℃30 染色，对杂合子进行筛选。因36bp片段较小，条带较弱，不易分辨，故以256bp 出现292bp条带(A型)或出现256bp(B型)为IGF2纯合个体。 3．基因印迹状态检测 选择杂合子标本，对其RT．PCR产物用相同的内切酶切，酶切后经12％非变 性聚丙烯酰胺凝胶电泳。如果IGF2的基因表达呈双等位基因表达型(AB型)即 292bp和256bp同时存在，说明发生了印迹丢失。如果只出现292bp条带(A型) 或出现256bp(B型)，说明转录来自于一条等位基因，即维持正常印迹状态。 4．统计学处理 采用Fisher确切概率法分析IGF2印迹丢失与临床病理资料的相关性。所有数 据均用SPSS16．0软件进行分析。 结果 1．PCR产物检测 产物为292bp，通过对PCR反应液的琼脂糖凝胶电泳后图像分析，以成功合 成产物。 2．杂合标本的筛选 其中杂合丢失1例。 3．印迹状态检测 I酶切后用聚丙 杂合标本的正常组织反转录的eDNA，经PCR后，再经Apa 烯酰胺凝胶电泳分离，在28例无杂合性丢失的杂合子中，有17例(60．71％)肿 瘤组织发生了LOI。在这17例肿瘤组织对应的癌旁组织中，有14例(82．35％) 发生了LOI，另外3例没有LOI。肿瘤组织和癌旁组织均无印迹丢失的有7例 (25％)。 4．IGF2的LOI与临床病理特征的关系 1人；无淋巴结 28例有意义的样本中，淋巴结转移的有13人，发生LOI的有1 0．05)，与肿瘤患者的年龄，性别，肿瘤发生的部位均无关(PO．05)。 2 结论 大肠癌组织和癌旁正常组织均出现LOI，发生LOI的肿瘤组织病例中癌旁组 织LOI发生率明显高于未发生LOI的肿瘤组织病例中癌旁组织出现LOI的发生 龄，性别，发生部位)无统计学相关性，与淋巴结转移存在正相关性。 关键词 大肠癌，IGF2，印迹丢失，淋巴结转移 3 ·英文论著摘要· The betweenthe relationship lossof