苜蓿生物技术中应用研究(已发表).docVIP

苜蓿生物技术研究 俞金蓉 玉永雄 （西南大学牧草与草食家畜重点实验室，重庆 北碚 400716） 摘要：苜蓿是世界上重要的豆科牧草，它具有品质优良易于栽培等特点在生态环境保护方面也发挥着积极作用，随着分子生物学和植物基因工程的发展，在分子水平上对苜蓿进行遗传改良的研究已取得了部分成果。本文简单介绍了苜蓿组织培养的种类及影响因素，综述了近年来遗传转化和分子标记等生物技术在苜蓿研究领域的应用，并展望了苜蓿基因工程在今后研究工作中的重要地位和发展前景。 关键词：苜蓿；生物技术；研究进展 Application of biological techniques in alfalfa YU Jin-rong, YU Yong-xiong (Southwest University, Forage Herbivore Key Lab., Beibei Chongqing 400716) Abstract: As an important legume forage plant in the word, alfalfa possesses quite a fine quality of nutrition, easily to be planted ,and playing a positive role in improving natural environment. With the development of molecular biology and genetic engineering of the plant some achievements about genetic improve of alfalfa have been obtained on the molecular level .In this paper, some types and influence factors of alfalfa tissue culture were introduced briefly, application in the research field of the alfalfa, such as genetic transformation and molecular marking was summarized .Finally, we also looked forward to the important position and prospect of alfalfa genetic engineering in the research wok in the future.. Keywords: Alfalfa; Biotechnology; Progress 苜蓿（Medicago sativa）Alfalfa或Lucerne，2 苜蓿遗传工程 由于苜蓿在畜牧生产上占有极其重要的地位。与其它牧草相比，生物技术在苜蓿中的研究进行得较为深入。各种研究手段，转化方法如原生质体融合、诱导变异、利用农杆菌介导、电击法、显微注射、基因枪直接导入外源DNA等均有成功报道。另外，转化的内容也极为广泛，包括品质改良，抗除草剂，抗病虫害，抗逆性等。 2.1 突变体细胞筛选 苜蓿经过脱分化或原生质体形成的再生植株，会产生变异，实验证明这些变异有些是可遗传的，而培养基中加入有毒物质或实验材料经过处理，产生变异机会更大。这是利用体细胞无性系变异选育新品系的基本原理。 在抗寒突变体的筛选方面：由继红等[6]报道，以紫花苜蓿叶片诱导产生的愈伤组织（诱导时间在一个月左右，继代次数不超过三代）为诱变供试材料，以EMS为诱变剂，进行低温筛选，成功地获得了抗寒性突变体。另外，已有许多的研究表明，生物胁迫和非生物胁迫都与活性氧有关。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）能消除活性氧对细胞膜的伤害。Mckersie等[6]1993年将烟草的Mn-SODcDNA 导入苜蓿后,转基因苜蓿的抗寒性得到了提高，并保持有较高的生活力。 在抗旱方面：张志胜和赵世绪[7]1995年以PEG为诱导剂和筛选剂，通过三种途径获得了抗旱性稳定的，抗20％PEG和抗25％PEG的愈伤组织以及抗20％PEG 的带芽愈伤组织，并从抗20％PEG 的愈伤组织和带芽愈伤组织获得了再生植株。 在抗盐性选择方面：Croughan 等[8]选择的紫花苜蓿耐盐细胞系可忍耐1％NaCl，中国农科院北京畜牧所也筛选出了在含盐量为0.3％的土壤中生长良好的苜蓿再生植株。 2.2 体细胞杂交 尽管苜蓿是优良的豆科牧草，但反刍动物采食新鲜茎叶后易得膨胀病，而红豆草、驴喜豆等植物中的凝缩单宁物质可以防止反刍家畜膨胀病的发生。为此人们大胆设想，若能将红豆草、驴喜豆中不