血小板活化与兔x2移植瘤相关性的研究.pdf

■ 摘 要 目的：对兔VX2肝移植瘤不同时期外周血中血小板活化标志物 CD62P表达水平进行监测、比较，观察血小板活化标志物CD62P表达水 平的变化以及血小板活化与血栓形成、肝癌的发生、发展、浸润、转 移之间的关系，探讨肿瘤细胞与血栓形成、血小板活化之间的相关性， 及血小板活化在肝癌病程进展、血行转移中的重要作用，为临床肝癌 的诊断、治疗、病情评估及预后等方面提供更多的理论依据，从血液 学角度寻求抗癌治疗新靶点，进一步提高肝癌患者的临床诊治水平， 延长肝癌患者的寿命，提高肝癌患者的生活质量。方法：1．将健康 新西兰大白兔共90只，随机分为：①肝移植瘤模型组30只；②假手术 组30只；③正常对照组30只；2．兔VX2肝移植瘤瘤株的复苏：从负氮瓶 中取出兔VX2瘤株 瘤株由第四军医大学唐都医院动物实验中心提 供 ，置于恒温箱中水浴复苏，复苏温度约为25—28。C，5分钟后取出 复苏的瘤株，置于无菌玻璃器皿中，加入3ml含2万u庆大霉素的生理 盐水，在无菌箱中将瘤株剪成1-2ram3大小的碎块，混匀制成混悬液备 用；3、荷瘤兔的制备：选健康新西兰大白兔2只，固定于动物台上， 选右侧臀部作为注射点，脱毛、常规消毒注射点皮肤后，用18G针头 注入lml备用的瘤细胞混悬液，拔针后压迫5分钟，防止瘤细胞混悬液 从穿刺道溢出，保证瘤株种植成功。荷瘤兔种植1周后，观察荷瘤兔 存活，触摸其右侧臀部已长出直径约2cm大小的包块，荷瘤兔制备成 功：4、瘤细胞混悬液的制备：准备切开荷瘤兔臀部肿瘤组织，制备 瘤细胞混悬液，进行传代转种。用速眠星II号将荷瘤兔全麻，无菌条 件下剥离肿瘤，切开瘤体，取靠近包膜的灰白色鱼肉样组织置于生理 盐水 含庆大霉素2万U 中，剔除坏死组织及纤维组织，将瘤组织剪 液备用。5、兔VX2肝移植瘤模型建立选健康新西兰大白兔30只由背 部脊柱旁皮下注射速眠星II号lml，观察实验动物麻醉成功。将其仰卧 位固定于动物台上，取上腹部剑突下正中线处为切口选择处，局部脱 毛、常规消毒后切开皮肤，切口长约3cm左右，逐层分离皮下组织， 打开腹腔，暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出，用18G针头在肝脏左叶注入 瘤细胞混悬液lml，进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵填塞、压 迫穿刺道5分钟，回纳肝脏，逐层关腹。依次成功种植兔VX2肝移植瘤 模型30只；6、假手术组的建立选健康新西兰大白兔30用上述同样 方法麻醉后，仰卧位固定于动物台上，取上腹部剑突下正中线处为切 口处，局部脱毛、常规消毒后切开皮肤，切口长约3cm左右，逐层分 离皮下组织，打开腹腔，暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出，在肝脏左叶用 18G针头注入生理盐水lml，进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵 填塞、压迫穿刺道5分钟，回纳肝脏，逐层关腹，依次成功操作假手 组兔子30只；7、正常对照组30只健康新西兰大白兔未进行任何干预 作为对照；8、采用流式细胞术 FCM 分别于瘤株种植前、瘤株种植 后6h、48h、1w、2w采各组实验动物外周血，检测血小板活化标志物 CD62P表达水平，比较兔肝移植瘤模型组不同时间外周血血小板活化 标志物CD62P表达水平的变化，观察各组实验动物血液循环中CD62P 表达水平的差异，分析转移组与无转移组CD62P表达水平的不同，所 得数据用均数±标准差 x±S 表示，两样本均数比较采用成组设计的 t检验，以P O．05为差异有统计学意义。9、在瘤株成功种植后1w、 2w各组分别处死并解剖15只实验动物，肉眼观察肝脏、肺内有无转移， 观察静脉内有无血栓形成；检测转移组与无转移组外周血血小板活化 标志CD62P的表达水平，比较转移组及无转移组间血小板活化标志物 表达水平的不同；分析有血栓形成组与无血栓形成组外周血小板活化 标志物表达有无差异。结果：1、瘤株种植前各组外周血血小板活化 标志物呈低表达状态，各组均数对LLP值分别为0．083△0．i0▲0．0880， 组间对比无明显差异；2、瘤株种植后6h假手术组、肝移植瘤模型组 外周血血小板活化标志物CD62P表达水平增加，假手术组与正常对照 组比较P O．Ol，肝移植瘤模型组与正常对照组比较P O．012，差异均有 统计学意义；肝移植瘤组与假手术组对比P O．084，组间对比无明显 变化；3、瘤株种植后48h，假手术组与正常对照组比较P O．023，肝 t 移植瘤组与正常对照组对比P O．Ol，肝移植瘤组、假手术组血小板活 化标志物的表达水平高于正常对照组。肝移植瘤组与假手术组对比 P O．013差异有统计学意义，肝移植瘤组血小板活化标志物CD62P表 达高于假手术组；4、瘤株种植后1w、2w时假手术组与正常对照组比 较P值均大于0．