灵杞黄斑颗粒含血清对兔视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究.pdfVIP

中文摘要 灵杞黄斑颗粒含药血清对兔视网膜色素上皮细胞 氧化损伤的保护作用及机制研究 摘要 目的：探讨灵杞黄斑颗粒含药血清对兔 RPE 细胞氧化损伤的保护作 用及机制。 方法：运用血清药理学方法制备灵杞黄斑颗粒含药血清，以 H2O2 （500 µmol/L ）诱导建立体外 RPE 细胞氧化应激模型，分为正常对照 （NC ）组、模型（M ）组、模型+空白血清（MS ）组、模型+低剂量药 物血清（ML ）组和模型+高剂量药物血清（MH ）组，分别采用MTT 、 TUNEL 和流式细胞方法对各组RPE 细胞的凋亡进行检测。进一步通过 测定 SOD 等抗氧化酶的活性以及 MDA 等不饱和醛类的水平，来反映 RPE 细胞的抗氧化能力与氧化损伤程度，并用 western blot ，免疫组化等 方法检测 Caspase-3 及 Bcl-XL 等凋亡相关蛋白表达的变化。相关统计分 析采用SAS6.12 统计软件。 结果：MTT结果显示含药血清可以促进细胞增殖，减少H O 对细胞生 2 2 长的抑制。流式细胞仪检测: NC、M 、MS 、ML 、MH组各组凋亡率分别为 4.85% ±0.46%、20.02% ±1.37%、21.84% ±1.53%、13.56%±0.87%、8.58% ±0.74% ，ML和MH组的凋亡率比M组明显减少。TUNEL检测结果：NC 组中未见明显凋亡细胞，M组中可见大量胞核黄色着染的凋亡细胞，ML 组中散见胞核黄色着染的凋亡细胞，数量明显少于M组，MH组凋亡细胞 进一步减少。MDA含量及SOD活性测定：与NC 组比较，M组RPE细胞 MDA含量明显增高，SOD活性明显下降；ML组MDA水平增高幅度较M 组减小，MH组更加减小，ML组和MH组SOD水平与M组相比均明显升高。 Caspase-3和Bcl-XL表达检测：M组Caspase-3蛋白表达上调，显著高于ML 和MH组；而Bcl-XL 蛋白表达下调，显著低于ML和MH组； 结论：灵杞黄斑颗粒含药血清对兔RPE细胞氧化损伤具有一定的保 护作用，且呈剂量依赖性。推测其可能通过清除自由基，下调Caspase-3 并上调Bcl-XL 的表达以发挥保护作用。 关键词：灵杞黄斑颗粒，老年性黄斑变性，视网膜色素上皮细胞， 氧化应激，血清药理学，凋亡 Protective effect and Mechanism of “Lingqi Huangban Granula” on oxidative stress-induced injury in rabbit retinal pigment epithelial cells Abstract Objective ： To observe the protective effect and Mechanism of drug-contained serum of“Lingqi Huangban Granula” (LQHB) on rabbit retinal pigment epithelial (RPE) cells of oxidative stress induced injury in vitro. Methods ： The oxidative stress model of cultured rabbit RPE cells was induced with hydrogen peroxide (500µmol/L) and different concentrations drug-contained serum of LQHB were administered. RPE cells were randomized into normal control group (NC group),