凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及其和耐寒性状的相关性.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2011 2 , 33(2): 168 ―174 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2011.00168 凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及与耐寒性状的 相关性 1, 2 1 1 1 2 2 1 殷勤 , 彭金霞 , 崔亮 , 谢达祥 , 王志伟 , 李奎 , 陈晓汉 1. , 530021; 2. , 100193 为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子机理, 文章克隆了凡纳滨对虾的耐寒相关基因TCP-1-eta 并对其与耐 寒性状的关系进行了研究。首先, 根据电子克隆所得序列设计引物, 采用 RT-PCR 方法克隆得到长 1 705 bp 的 TCP-1-eta 基因序列, 其中包括 1 629 bp 的完整开放阅读框, 编码542 个氨基酸残基。然后, 运用荧光定量PCR 对TCP-1-eta 基因进行时空表达谱的分析: (1) 组织表达分析结果显示, 该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量 最高; (2) 不同低温处理下的表达结果显示, 该基因在 15℃开始呈上调表达, 13 时表达量最高; (3) 13 低温处 理的表达结果显示, 该基因在36 h 内呈小幅上调表达, 但36 h 后表达量显著升高, 48 h 表达量达到0 h 的150 倍。进一步采用PCR-RFLP 方法对216 只凡纳滨对虾TCP-1-eta 基因进行了 SNP 多态性检测, 并将其与耐寒性 状进行了关联分析。在该基因编码区第731 碱基上发现C/T 突变, 方差分析结果表明该位点的不同基因型与耐 寒力指标CDH (Cooling-degree hours)值相关(P ＜0.05), 其中CC 基因型的耐寒能力比 TT 基因型强。 凡纳滨对虾; TCP-1-eta; SNP; 耐寒性状 Molecular cloning of Litopenaeus vannamei TCP-1-eta gene and analysis on its relationship with cold tolerance 1,2 1 1 1 2 2 YIN Qin , PENG Jin-Xia , CUI Liang , XIE Da-Xiang , WANG Zhi-Wei , LI Kui , CHEN Xiao-Han1 1. Guangxi Fishery Institute, Nanning 530021, China; 2. Institute of Animal Sciences (IAS), Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China Abstract: To study the molecular mechanism of cold tolerance, we cloned TCP-1-eta homolog gene from Litopenaeus vannamei and studied its relationship with cold tolerance. Based on the sequence from electronic cloning, a pair of primers were designed, and a 1 705 bp cDNA was obtained by RT-PCR. The cDNA contains 1 629 bp ORF, w