灵芝孢子粉多糖的色谱指纹图谱的研究.pdf

摘要 摘 要 灵芝是一种真菌，可食用和药用，是中医药学宝库中的珍品。灵芝由于具有免疫调 节等多种生理功效，故在近年来备受关注。因缺乏科学全面的检测方法和质量标准，大 量人工栽培生产的灵芝孢子粉、子实体和菌丝体及其加工产品的质量良莠不齐，难以有 效控制和鉴别。本课题针对灵芝孢子粉的主要免疫活性成分多糖类物质，采用多种不同 模式的色谱分析技术尝试表征孢子粉中多糖的组成和结构特性，从中选择较优方法，对 不同产地的灵芝孢子粉样品中的多糖进行分析和比较，确定共有特征峰，利用“中药色 谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”建立灵芝孢子粉多糖的标准指纹图谱，并进行相 似度评价。该指纹图谱方法的建立，可为我国灵芝孢子粉的质量检测方法和质量标准的 提升及完善提供科学依据与参考。 为充分提取出灵芝孢子粉样品中的多糖成分，并尽量避免其多糖的降解和损失，首 先对灵芝孢子粉多糖的提取方法进行了较系统的研究。采用超声辅助提取，微波辅助提 察提取温度、提取时间、料液比等因素对多糖提取率的影响，并结合采用高效体积排阻 色谱法(HPSEC)分析其多糖分子量分布，从多糖提取率和相对分子质量分布两方面， 进行比较，从而优化提取方法及条件。结果表明，三种提取方法中对灵芝孢子粉多糖的 提取有显著影响的一个因素是提取温度，且在不同提取方法的最佳提取条件下，孢子粉 微波辅助提取法(51．7％)。考虑到ASE法的提取成本较高且设备不够普及，超声波 法与ASE法的提取效果差异不大，故在本文的色谱指纹图谱分析中，均选用超声波法 提取灵芝孢子粉多糖。 为使多糖的水解产物较好地反映不同孢子粉样品中多糖的组成和结构上的差异，考 察了不同的酸水解时间和酸浓度对孢子粉多糖的水解产物的分子量分布和不同聚合度 糖组分的量的影响，确定了最佳部分酸水解条件，即：沸水浴中用0．5mol／L的三氟乙 酸(TFA)水解60min。 反相HPLC法，对灵芝孢子粉样品中多糖进行表征和比较，结果表明，部分酸水肛PMP 柱前衍生RP．HPLC法的分离度和峰形均较好，共有峰较多，指纹信息较丰富，更适合 于孢子粉多糖的特性表征和指纹图谱的构建。 在优化的条件下提取15个不同产地的灵芝孢子粉样品中多糖成分，并进行部分酸 水解，采用PMP柱前衍生反相高效液相(HPLC)法进行分析比较，确定共有峰14个， min至55 峰面积超过总峰面积5％的特征峰有4个，其指纹区位于17 min之间；应用“中 药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版’’软件建立了灵芝孢子粉多糖的标准指纹图 谱，并采用夹角余弦法计算了不同产地样品的多糖相似度。 摘要 方法学验证结果表明，上述指纹图谱方法稳定，精密度高，重现性好，能较简便地 从色谱的整体特征面貌上反映灵芝孢子粉多糖的组成和结构特性。 关键词：灵芝孢子粉，多糖，超声波辅助提取，高效液相色谱，指纹图谱 n Abstract Ganodermaedibleand lucidum，a medicinalatreasureinChinesemedicine．In fungi，is recent lucidumis much to years，Ganoderma attentionduetheir of paid variety effectsas suchimmune of cultivated ofGanoderma regulation．The qualitymany products lucidum