akt及其下游转录因子在胃癌耐药细胞中表达的研究.pdf

Akt 及其下游核转录因子在胃癌耐药细胞中表达的研究 摘要 目的：通过比较胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP 和非耐药细胞株 SGC7901 中Akt1 及其下游核转录因子NF-κB p65 、FOXO3a 表达的 变化，探讨导致胃癌耐药的PI3K-AKT 通路的调节机制，以期为胃癌 多药耐药的防治提供理论依据。并通过观察Akt1 及NF- κB 、FOXO3a 在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌临床病理之关系。 方法：1. 应用化疗药物顺铂按照 0.02-1.0ug/ml 浓度梯度递增 诱导胃癌SGC7901 细胞株，形成胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP。将 其培养在DDP 浓度为0.5ug/ml 的培养液中以维持其耐药表型。以非 耐药细胞株SGC7901 作对照，应用RT-PCR 及Western Blotting 分别 从mRNA 水平及蛋白水平检测Akt1 、NF-κB p65 、FOXO3a 的表达差 异。分析耐药胃癌细胞中Akt1 的变化及其与下游NF-κB 、FOXO3a 的关系。 2.取胃癌患者的肿瘤组织标本，制成组织芯片，以非胃癌患者的 正常胃粘膜活检组织为对照，检测胃癌组织与正常胃粘膜组织中 Akt1 、NF-κB p65 、FOXO3a 的表达的差异，并进一步分析胃癌组织 中Akt1 、NF-κB p65 、FOXO3a 与临床病理学特征的关系，以及Akt1 表达与其下游核转录因子NF-κB p65 、FOXO3a 之间的关系。 结果：1. 与胃癌非耐药细胞株SGC7901 相比，胃癌耐药细胞株 IV SGC7901/DDP 中Akt1 、NF-κB p65 mRNA 和蛋白水平的表达显著升 高（p0.05），而FOXO3a mRNA 和蛋白的表达水平则下降（p0.05）。 2.免疫组织化学研究显示，胃癌组织的Akt1 和NF-κB 的阳性表达率 显著高于正常胃粘膜组织，且其表达与肿瘤大小，分化程度，浸润深 度，脉管浸润显著相关；而FOXO3a 在胃癌中阳性表达则较正常胃组 织显著降低（p0.05）。3.胃癌患者的肿瘤组织中Akt1 表达与NF-κB 表达呈正相关，而与FOXO3a 表达呈负相关（p0.05）。 结论：1. 胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP 中Akt1 及其下游核转录 因子 NF-κB 表达上调，而 FOXO3a 表达则下调。提示胃癌耐药的 PI3K-AKT 通路可能是通过NF-κB 的表达上调、FOXO3a 的表达下调 起作用的。2. 胃癌组织中AKT1 及NF-κB 阳性表达较正常胃组织显 著升高，其表达与肿瘤大小，分化程度，浸润深度，脉管浸润显著相 关；而 FOXO3a 在胃癌中阳性表达则较正常胃组织显著降低，提示 Akt1 及其下游靶蛋白NF-κB 和FOXO3a 可能参与了胃癌的发生、发 展，NF-κB 和 FOXO3a 可能成为判断胃癌患者预后的新的指标，并 可作为胃癌治疗的新的分子靶点。 关键词：胃癌，多药耐药，Akt ，NF-κB ，FOXO3a V Abstract Objectives: To investigate the expression of Akt1, NF-κB and FOXO3a in gastric cancer drug-resistance cell SGC-7901/DDP and explore the mechanism of drug-resistance of gastric cancer. Also through observing the expression of AKT1, NF-κB and FOXO3a in tissues of gastric cancer we investigate their relationship with clinic pathology. Methods: To transform