云南兰坪地区带虫种类鉴定.pdf

云南兰坪地区带绦虫种类鉴定 研究生：奚琳琳 导师：杨毅梅教授 摘 要 目的：对云南兰坪地区带绦虫(LP株)进行种类鉴定；寻找操作简便、经济和准 确的带绦虫种类鉴定方法。 方法：(1)形态学鉴定：采用盐酸卡红和孔雀绿染色，选择7株LP株带绦虫成 虫的头节、成节和妊娠节片，并选取传统的猪带绦虫和牛带绦虫为对照，对LP 株的种类进行初步的形态学鉴定；(2)rDNA-ITS限制性酶切片段长度多态性分 内切酶DdeI对扩增片段进行酶切分析，并与贵州都匀株(DY株)、牛带绦虫从 随机选取一LP株的基因组DNA，进行rDNA-ITSIPCR扩增、克隆和测序，并与 进行同源性比较，构建系统发育树状图。 结果：(1)由形态学析可知，7株LP株头节近方形，有4个吸盘，无顶突和小钩， 成节卵巢分两叶，孕节子宫分支排列大致对称整齐，每侧分支数约15～30支， ·根部具有分支，支端有分叉，形态介于传统牛带绦虫和猪带绦虫间，与报道的 切酶Dde 显著不同；(3)不同来源带绦虫株rDNA-ITSI片段测序结果经同源性分析表明， 为92％，其中Tw株、DY株和DL株同源性为99％；构建系统发育树状图后，DY 株、DL株、Tw株和LP株依次归类，再和CJ株归类，最后与ZD株归类。 染色为一种孔雀绿染色改良方法，适于绦虫妊娠节片染色；(3)PCR—RFLP方法 经济、准确，能够对不同种类的带绦虫进行鉴别，适于带绦虫的分子流行病学 调查。 云南!坪地区带绦l虫种类鉴定 关键词亚洲带绦虫；分类鉴定；分子生物学；兰坪；云南 2 云南兰坪地区带绦虫种类鉴定 IdentificationofTaeniacestodein Province Lanping，Yunnan Lin·-lin Yi·-mei Postgraduate：XiSupervisor：Prof．Yang Abstract Identify in ObjectivetapewormspeciesLanping，YunnanProvince(LPStrain)，and lookfor andreliablemethodsofidentificationonTaenia simple，economical types． scolex，matureand Methods(1)MorphologicalIdentification：Cuttingproglottid ofLP MalachiteGreen and gravidproglottidStrains，dyeingrespectivelyby Staining Acid Red a identificationof Hydrochloric Card，conduct Staining preliminary DNAofTaeniacestodeWaSextractedfrom Morphology．(2)PCR—RFLP：Genomic the of fromLP asiaticaof gravidtapewormsStrain，Taenia segments sagi