人脐带间充质干胞移植在颅脑损伤的作用研究.pdf

JMIIIIIIIIrlllPlllllllllllllllllllJlllI 目 录 Y2337457 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………3 研究论文人脐带间充质干细胞移植在颅脑损伤的作用研究 前言……………………………………………………………………6刖吾……………………………………………………………………6 材料与方法……………………………………………………………7 结果……………………………………………………………………16 附图……………………………………………………………………19 附表……………………………………………………………………24 讨论……………………………………………………………………26 结论………………………………………………．…………………．．28 参考文献………………………………………………………………28 综述人间充质干细胞经体内定植向神经样细胞分化的研究…………32 致谢…………………………………………………………………………38 个人简历……………………………………………………………………39 中文摘要 人脐带间充质千细胞移植在颅脑损伤的作用研究 摘 要 目的：建立大鼠液压冲击颅脑损伤模型，探讨人脐带间充质干细胞 umbilical cord stem (human mesenchymal 伤大鼠神经功能恢复的影响以及移植细胞的存活、迁移和神经分化情况， 为其在颅脑损伤治疗的应用提供理论依据。 方法：取足月妊娠剖宫产健康新生儿的脐带，利用酶消化法和贴壁法 获得原代细胞，传3～5代备用。收集消化后的细胞，流式细胞学检测CD45 PE、CD90PE、 CDl05PE、CD73PE、CDllbPE和CD34FITC、CDl9 FITC，HLA-DR 制作液压冲击颅脑损伤模型。模型制备成功24小时后，采取改良神经功 能评分(modified NeurologicalSeverity buffered 冲液(phosphate 注射到颅脑损伤部位。(3)单纯颅脑损伤：lO只，行开骨窗和颅脑损伤处 只开骨窗，不行颅脑损伤处理，亦不行细胞移植。 四组大鼠分别采用改良的神经功能评分(modified severity 14天、21天、28天进行神经功能评分，观察其神经功能改善情况。评分 结束后采用RT-PCR技术检测移植细胞胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic enolase， protein，OFfal)、神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific basic NSE)、巢蛋白(Nestin)以及髓鞘碱性蛋l刍(myelin 达情况，并进行比较。 结果： 中文摘要 细胞接种4，6h后观察到少量细胞贴壁，12h以后大部分细胞贴壁。 接种7d时，细胞汇合达到80％～90％，消化后按1：2或1：3的比例传代。 细胞传代后，形态均一，生长迅速，3—4d可传一代。流式细胞学检测结果 显示：hUC-MSCs表达间充质干细胞表面抗原CDl 表达B型淋巴细胞表面抗原CDl9、造血前体细胞表面抗原CD34、白细 hUC．MSCs细胞活力好，台盼蓝染色显示细胞存活率达95％以上。 10．O％；PBS组死亡6只，死亡率为30．O％；单纯颅脑损伤组死亡4只， 差异有统计学意义(氏O．05)。 化神经功能恢复优于单纯