胚胎干细胞微环对角膜上皮细胞生物学特性的影响.pdfVIP

胚胎干细胞微环境对角膜上皮细胞生物学特性的影响 胚胎干细胞微环境对角膜上皮细胞生物学特性的影响 专 业：眼科学 学位申请人：胥莹 导 师：王智崇教授 摘要 目的 通过添加胚胎干细胞培养上清液，以及与胚胎干细胞共培养，观察胚胎干细 胞微环境对角膜上皮细胞形态学及生物学特性的影响，初步探索应用胚胎干细胞 微环境诱导细胞去分化的可能性。 方法 1．取材并培养P1--P6代的人角膜上皮细胞，设定实验组为添加30％胚胎干 细胞培养上清液培养的细胞，对照组为常规培养液培养的细胞。倒置相差显微镜 比较观察两组角膜上皮细胞形态，MTT法测定两组P1--P6代细胞生长曲线，流 式细胞仪测定P1--P6代细胞生长周期。 2．将GFP--ES与P3代角膜上皮细胞共培养，倒置相差显微镜及荧光显微镜 观察细胞形态，流式细胞仪分选荧光阴性细胞。 结果 1．在倒置显微镜观察下，实验组与对照组的角膜上皮细胞白P1代至P6代形 态学并无明显差异。 MTT法测定细胞生长曲线：P2代实验组细胞第3天进入对数生长期，对照 组第4天进入对数生长期；P4代实验组细胞对数生长期为第3—6天，对照组细 胞对数生长期为第4—6天；P5代实验组细胞对数生长期为第2—4天，对照组 胚胎千细胞微环境对角膜上皮细胞生物学特性的影响 细胞对数生长期为第2—6天；P6代实验组细胞对数生长期为第2—5天，对照 组细胞对数生长期为第2—7天。 流式细胞仪测定细胞周期：P2代实验组细胞处于S期的比例是40．7％，剥 照组细胞处于s期的比例是28．6％；P3代实验组细胞处于s期的比例是43．4％， 对照组细胞处于S期的比例是53．9％；P5代实验组细胞处于s期的比例是43．4 4 ％，对照组细胞处于S期的比例是49％；P6代实验组细胞处于S期的比例是27 ％，对照组细胞处于S期的比例是32．2％。 2．与胚胎干细胞的共培养的人角膜上皮细胞形态有所变化。细胞体积变小， 核浆比变大，形态也变得比较规则，更接近原代从角膜缘萌出的细胞。流式细胞 仪分选前荧光阴性率为42％，分选后收集的细胞荧光阴性率为92．2％。 结论： 胚胎干细胞培养上清液对体外培养角膜上皮细胞的影响，需要作用至少一代 的时间才能检测到变化。表现为使角膜上皮细胞的对数生长期增长，角膜卜皮细 胞进入S期的细胞比例增多。 胚胎干细胞与人角膜上皮细胞共培养，更利于胚胎干细胞体外生长的微环境 对角膜上皮细胞的影响，能够观察到角膜上皮细胞形态学向幼稚细胞方向变化。 胚胎干细胞微环境对于人角膜上皮细胞去分化的影响是一个有益的探索，其 最终实现的可能仍需要在去分化理论和机制研究进一步发展的基础卜I进行更深 入的探讨。 关键词： 胚胎干细胞：角膜上皮细胞；去分化；共培养 胚胎干细胞微环境对角膜上皮细胞生物学特性的影响 TheEffectof StemCells’ Embryonic MicroenvironmenttoCorneal Cells Epithelial Major：Ophthahnology Name：Xu Ying Supervisor：Prof．ZhichongWang ABSTRACT Purpose The wastoobservetheeffectof stem study