2种harpin内源表达对短短芽孢杆菌HAB-5菌株br抑制和促生能力的影响.pdfVIP

江苏农业科学　２０１５年第４３卷第１１期 — １６１— 汪　惠，谢琳琳，刘文波，等．２种ｈａｒｐｉｎ内源表达对短短芽孢杆菌ＨＡＢ－５菌株抑制和促生能力的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（１１）：１６１－１６６． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．１１．０４６ ２种ｈａｒｐｉｎ内源表达对短短芽孢杆菌 ＨＡＢ－５菌株 抑制和促生能力的影响 汪　惠，谢琳琳，刘文波，林春花，缪卫国，郑服丛 （海南大学环境与植物保护学院／海南热带生物资源可持续利用重点实验室，海南海口５７０２２８） 　　摘要：采用化学方法分别将来自水稻白叶枯病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）、棉花角斑病菌（Ｘ．ｃｉｔｒｉｓｕｂｓｐ． ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ）ｈｒｐ基因簇中的ｈｐａ１ 、ｈｐａ 基因转化至生防菌短短芽孢杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｓ）ＨＡＢ－５菌株，测定２ Ｘｏｏ Ｘｍ 种ｈａｒｐｉｎ蛋白对短短芽孢杆菌抑菌和促生能力的影响，以期获得更高效的生防菌株。结果表明，获得转入ｈｐａ１ 的突 Ｘｏｏ 变体５８１个，转入ｈｐａ 的突变体有６５０个；经ＰＣＲ及ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ验证，确定ｈｐａ１ 、ｈｐａ 基因均成功转化至 Ｘｍ Ｘｏｏ Ｘｍ ＨＡＢ－５菌株中；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，在分子量大小约３９、４１ｋｕ处可见明显条带，表明ｈｐａ１ 、ｈｐａ 基因分别编码的 Ｘｏｏ Ｘｍ 融合蛋白ＧＳＴ－ｈａｒｐｉｎＸｏｏ、ＧＳＴ－ｈａｒｐｉｎＸｍ在突变体菌株中得到表达；与出发菌株ＨＡＢ－５菌株相比，转化后的突变 体在菌落形态、拮抗活性上均发生了改变，且突变体总蛋白可在烟草叶片上激发过敏性反应，而ＨＡＢ－５菌株总蛋白 不能激发过敏性反应；突变体菌株对番茄种子的促生作用显著提高，且转入ｈｐａ 基因的菌株效果更佳，使胚芽、胚根 Ｘｍ 的生长分别提高１００．７７％、６９．１４％。可见，ｈａｒｐｉｎ能够在短短芽孢杆菌ＨＡＢ－５菌株中得到表达，且转化后的突变体 表现出良好的促生效果。 　　关键词：ｈｐａ１ ；ｈｐａ ；转化；短短芽孢杆菌ＨＡＢ－５；过敏性反应 Ｘｏｏ Ｘｍ 　　中图分类号：Ｓ４７６　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）１１－０１６１－０６ 　　ｈａｒｐｉｎ是一类由革兰氏阴性植物病原细菌ｈｒｐ基因编码 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）、棉花角斑病菌（Ｘ．ｃｉｔｒｉｓｓｐ． （ 的蛋白质，由不依赖信号肽的 型分泌机制分泌到胞外，可在 ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ）ｈｒｐ基因簇中ｈｐａ１（ｈｒｆ１）基因编码的蛋白，均具有 Ⅲ 非寄主植物上引起过敏反应 （ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅ， ｈａｒｐｉｎ蛋白的共同特征，且能诱导烟草、拟南芥、番茄、矮牵牛、 ［１－３］ ［７－８］ ＨＲ） 。在非寄主植物上施用Ｈａｒｐｉｎ蛋白，可使植物产生 马铃薯、大豆、黄瓜、辣椒等多种植物产生过敏性反应 。