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江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１期 — ５５— 李庆伟，梁明勤，樊亚敏，等．不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１）：５５－５８． 不同取材时期和处理方法对瓦松无菌体系建立的影响 李庆伟，梁明勤，樊亚敏，刘荣宁，贺爱利 （河南农业职业学院现代农业工程系，河南郑州４５１４５０） 　　摘要：以瓦松植株为外植体进行组织培养，探索不同取材时期、处理方法、消毒时间、激素配比等对其无菌体系建 立的影响，结果表明，无菌体系建立的材料以５月上旬取材、取材后对材料进行假植处理、剪去新萌生的茎段作为外植 体为宜；材料用０．１％的ＨｇＣｌ溶液消毒１０ｍｉｎ后接种，污染率在５％以下，存活率在９２％以上；在ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ ２ ６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的启动培养基中，芽启动率为９９．７８％，外植体并没有出现愈伤组织、玻璃化等现象。 　　关键词：瓦松；取材时期；处理方法；无菌体系 　　中图分类号：Ｑ９４５．５２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）０１－００５５－０３ 　　瓦松（Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）别称瓦花、瓦塔、瓦玉等，为景 １．３　材料培养 天科瓦松属２年生草本肉质植物，在河南、江苏等省及朝鲜、 初代培养基，以ＭＳ培养基为基本培养基，采用２因素完 ［１］ 日本等国家和地区有分布 。瓦松植株中含有多种酸类、景 全随机设计（表 １）。培养基采用高压蒸汽灭菌，在 １２１℃、 ［２－５］ ２ 天庚酮糖苷及异丙叉基景天庚酮糖苷等物质 ，主要用于 １．１ｋｇ／ｃｍ 压力下灭菌 １５ｍｉｎ。接种材料置于温度 ２４～ ２ 药物合成，目前，利用瓦松参与合成的药品不下２７种。在临 ２６℃、光照时间１４ｈ／ｄ、光照强度 ３０ ｍｏｌ／（ｍ ·ｓ）的条件 μ 床上，主要用于治疗宫颈糜烂、肾性皮肤瘙痒、痔疮、口腔溃疡 下进行培养。 ［６－９］ 等症状 。随着研究深入，以瓦松为原材料加工而成的药 表１　瓦松初代培养基的组合设计 品，将更多地应用在临床上。自然条件下，瓦松生存完全依靠 水平 Ａ：ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ） Ｂ：６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ） 自生自灭。近年来，由于受气候异常变化、花期采药、生境发 １ ０ ０ 生变化等影响，瓦松资源受到严重破坏，保护瓦松资源刻不容 ２ ０．１ ０．１ 缓。目前，国内外并没有发现关于瓦松繁殖，尤其是快速繁殖 ３ ０．３ ０．５ 的研究报道。探索并利用生物技术手段，对瓦松进行种苗繁 ４ ０．５ １．０ 育技术研究，对深度挖掘瓦松的潜在药用价值，进一步加快瓦 １．４　数据统计与分析 松的开发利用具有十分重要的意义。 接种后２ｄ开始调查，后每隔３ｄ调查 １次，记载污染发 生的时间、类型、部位，外植体受伤害情况，腋芽初始萌动时 １　材料与方法 间、腋芽萌动程度、材料的生理状态等，接种后２２ｄ统计污染 １．１　试验材料