低分子量树枝状聚乙烯亚胺-igi-黄秋葵多糖作为基因药物合成载体的构建.pdfVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第８期 — ３９— 闵莉静，李敬芬．低分子量树枝状聚乙烯亚胺－ｇ－黄秋葵多糖作为基因药物合成载体的构建［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（８）：３９－４２． 低分子量树枝状聚乙烯亚胺 －ｇ－黄秋葵多糖 作为基因药物合成载体的构建 闵莉静，李敬芬 （湖州师范学院生命科学学院，浙江湖州３１３０００） 　　摘要：通过合成设计，获得１种转染率高、细胞毒性低、生物相容性好的基因药物合成载体。用水煮醇沉法提取黄 秋葵多糖，纯化，键合树枝状聚乙烯亚胺（ｂＰＥＩ，分子量为６００、１２００ｕ），获得ｂＰＥＩ－ｇ－黄秋葵多糖复合物，并对复合 １ 物进行系列理化生表征。ＨＮＭＲ结果表明复合物合成成功；凝胶阻滞电泳结果表明，在复合物与质粒ＤＮＡ重量比在 ５∶１时，复合物能与质粒ＤＮＡ牢固结合，且在投射电镜下观察看到，复合物包裹质粒 ＤＮＡ成直径约为２００ｎｍ的核 状；细胞毒性试验表明，该复合物毒性远低于ＰＥＩ－２５ｋｕ，而细胞转染效率试验结果表明，该复合物转染效率较高，当 重量比为７０∶１时，与ＰＥＩ－２５ｋｕ接近。说明ｂＰＥＩ－ｇ－黄秋葵多糖复合物是一种高转染、低毒、生物兼容的基因药 物合成载体。 　　关键词：低分子量；树枝状；聚乙烯亚胺；黄秋葵多糖；合成载体 　　中图分类号：Ｑ７８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）０８－００３９－０４ 　　基因治疗有望解决一些内源性疾病，该过程中基因药物 料有限公司；绿色荧光蛋白质粒ｐＥＧＦＰ－Ｎ１均为上海市肿瘤 载体具有极其重要的作用。目前，临床应用的基因药物载体 研究所惠赠；质粒提取试剂盒购自Ｑｉａｇｅｎ公司；荧光素酶检 主要为病毒性载体，具有易引起免疫反应和基因突变的潜在 测试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。ＣＯＳ－７细胞（非洲绿猴肾上皮 ［１］ 危险 ，所以，人工合成的非病毒基因药物载体成为研究热 细胞）培养于含有１０％小牛血清的１６４０培养基中，由浙江大 点。其中，基于聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）的阳离子非病毒载体由于 学肿瘤免疫所赠送。ＭＴＴ溶液：５ｍｇ／ｍＬ甲基噻唑基四唑× 其结构中的胺基能与ＤＮＡ很好地结合，保护ＤＮＡ不被酶降 ＰＢＳ液，过滤除菌，避光，２０℃保存；磷酸缓冲液（ＰＢＳ）溶液： 解而获得更多的重视。ＰＥＩ的转染效率与其分子量成正比， ８．０ｇＮａＣｌ、３．４７８５ｇＮａＨＰＯ ·１２ＨＯ／２．９ｇＮａＨＰＯ、 ２ ４ ２ ２ ４ 高分子量的ＰＥＩ具有高转染率，但细胞毒性也高。目前研究 ０．２ｇＫＣｌ、０．２ｇＫＨＰＯ 溶于 １０００ｍＬ蒸馏水；Ｔｒｉｓ－乙酸 ２ ４ 表明，ＰＥＩ－２５ｋｕ具有最高的转染效率，但毒性也最大；低分 （ＴＡＥ）缓冲液：Ｔｒｉｓ碱２４２ｇ、冰乙酸５７．１ｍＬ、ＥＤＴＡ１８．６１２ｇ ［２－４］ 子量的ＰＥＩ虽然细胞毒性较低，但几乎没有转染率 。目 溶于０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液中，加水定容至１０００ｍＬ。 前，大家都在寻求通过修饰ＰＥＩ的结构获得低毒、高效的基因 １．２　仪器 药物载体。黄秋葵多糖是从药食两用的植物———黄秋葵果实 透析膜（分子量 ８０００～１４４００ｕ）购 自Ｐｉｅｒｃｅ公司； 中提取的一种天然植物多糖，具有降脂、降压、抗癌、抗热应激 ＦＤ－１冰冻干燥机；瓦里安４００ＭＨｚ核磁共振仪；Ｕ－２８００紫 性、抗疲劳等生理活性［５］。其结构中存在大量的—ＯＨ，可以 外分光光度计；ＪＥＭ－２１００ＨＲ透射电镜；Ｓｅｒｉｅｓ 细胞培养