广藿香不同组织总RNA提取方法的筛选与优化.pdfVIP

江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１２期 — ５３— 陈　英，吴友根，杨东梅，等．广藿香不同组织总ＲＮＡ提取方法的筛选与优化 ［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１２）：５３－５５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１４．１２．０１５ 广藿香不同组织总ＲＮＡ提取方法的筛选与优化 陈　英，吴友根，杨东梅，张军锋，林尤奋，胡新文 （热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室／海南大学园艺园林学院，海南海口５７０２２８） 　　摘要：分别采用Ｔｒｉｚｏｌ法、改良Ｔｒｉｚｏｌ法、ＣＴＡＢ法、改良ＣＴＡＢ法和异硫氰酸胍 －ＳＤＳ法等５种方法提取广藿香 叶、茎、根及愈伤组织的总ＲＮＡ，并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱检测其提取效果。结果表明，Ｔｒｉｚｏｌ法适用于广藿香 叶片总ＲＮＡ的提取，改良ＣＴＡＢ法适用于广藿香茎和愈伤组织总ＲＮＡ的提取，而广藿香根总ＲＮＡ的提取宜用改良 Ｔｒｉｚｏｌ法。ＲＴ－ＰＣＲ检测结果表明，广藿香各组织的总 ＲＮＡ可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学 试验。 　　关键词：广藿香；总ＲＮＡ；提取方法；Ｔｒｉｚｏｌ法；ＣＴＡＢ法；异硫氰酸胍－ＳＤＳ法 　　中图分类号：Ｑ５２２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）１２－００５３－０３ 　　广藿香［Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ（Ｂｌａｎｃｏ）Ｂｅｎｔｈ．］为唇形科刺 异硫氰酸胍（北京鼎国公司），其余试剂均为进口或国产分析 蕊草属植物，原产于东南亚地区如马来西亚、菲律宾、印度尼 纯，引物由北京诺赛基因组研究有限公司合成。试验中所用 ［１］ 西亚等国，在我国引种可追溯到梁代或以前 。我国主要栽 枪头、ＰＣＲ管、离心管等塑料耗材均用０．１％ ＤＥＰＣ水浸泡处 培地为海南和广东２省，广西、福建及台湾等地也有少量栽 理过夜，并于 １２１℃ 下高压灭菌２０ｍｉｎ，烘干，备用；用于 培。广藿香以干燥地上部分入药，是我国常用的芳香化湿类 ＲＮＡ提取的研钵、玻璃器皿均在１８０℃下烘烤６～８ｈ，备用。 中药之一，常用于治疗湿浊中阻、脘痞呕吐、暑湿倦怠、胸闷不 １．２　方法 ［２］ ［６］ 舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛等疾 。广藿香不仅是３０ １．２．１　 ＲＮＡ提取方法　采用传统 Ｔｒｉｚｏｌ法 、改良Ｔｒｉｚｏｌ 多种中成药的主要原料，而且以其提取的广藿香油还是医药 ［６］ ［７］ ［８］ 法 、传统 ＣＴＡＢ法 、改良ＣＴＡＢ法 和异硫氰酸胍 － ［３］ ［９］ 和轻化工业的重要原料 。从植物组织中提取完整性好、纯 ＳＤＳ法 。 度高的ＲＮＡ，是开展植物分子生物学研究的前提和基础，是 １．２．２　ＲＮＡ质量与浓度检测　取５ Ｌ提取的广藿香各组 μ ［４］ 研究基因克隆及表达分析的重要环节 。但广藿香各组织 织总ＲＮＡ溶液于１．２％琼脂糖凝胶在 １×ＴＢＥ缓冲液中电 总ＲＮＡ提取方法尚鲜见报道，且广藿香富含多糖等次生代谢 泳，检测ＲＮＡ的完整性。并取１ ＬＲＮＡ样品，用ＤＥＰＣ处理 μ ［５］ 产物 ，对总ＲＮＡ提取的影响