广藿香根际土壤微生物总DNA提取方法的优化.pdfVIP

江苏农业科学　２０１５年第４３卷第２期 — ４５— 徐　岩，吴友根，张军锋，等．广藿香根际土壤微生物总ＤＮＡ提取方法的优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（２）：４５－４７． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０２．０１３ 广藿香根际土壤微生物总ＤＮＡ提取方法的优化 徐　岩，吴友根，张军锋，杨东梅，胡新文 （热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室／海南大学园艺园林学院，海南海口５７０２２８） 　　摘要：提取高质量的土壤微生物ＤＮＡ是进行后续分子生物学试验的前提。在３种常用土壤微生物ＤＮＡ提取方 法的基础上，提出了１种新的优化方案，包括使用添加聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）的磷酸缓冲液对土壤进行预洗、联合使 用ＳＤＳ－ＣＴＡＢ和蛋白酶Ｋ来破碎细胞、用酚－氯仿－异戊醇（２５∶２４∶１）除蛋白质和淀粉等杂质、使用ＰＥＧ８０００沉 淀ＤＮＡ、用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化ＤＮＡ等。比较分析了优化的方法与其他３种常用方法所获得的总ＤＮＡ产率 和纯度的差别，结果表明，优化的方法所提取ＤＮＡ的Ｄ ／Ｄ 、Ｄ ／Ｄ 值均高于其他３种方法，且ＰＣＲ扩增 ２６０ｎｍ ２３０ｎｍ ２６０ｎｍ ２８０ｎｍ 条带清晰、ＤＮＡ产率高，土壤中ＤＮＡ得率达８８．７６ ｇ／ｇ，表明该方法适宜提取土壤中的微生物ＤＮＡ，从而为研究广藿 μ 香根际土壤微生物种类及其多样性奠定了基础。 　　关键词：广藿香；总ＤＮＡ；根际土壤；微生物；提取方法 　　中图分类号：Ｓ１５４．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０２－００４５－０３ 　　广藿香［Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ（Ｂｌａｎｃｏ）Ｂｅｎｔｈ．］为唇形科刺 呕吐、暑湿倦怠、胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛 蕊草属植物，原产于东南亚地区，如马来西亚、菲律宾、印度尼 ［２］ 等 。广藿香不仅是３０多种中成药的主要原料，而且从其中 ［１］ ［３］ 西亚等国，在我国引种可追溯到梁代或以前 ，我国的主要 提取的广藿香油还是医药和轻化工业的重要原料 。然而， 栽培地为海南、广东两省。广藿香以其干燥地上部分入药，是 广藿香在种植过程中连作障碍十分明显，通常认为根系分泌 我国常用的芳香化湿类中药之一，常用于治疗湿浊中阻、脘痞 物会破坏土壤微环境、改变土壤微生物群落结构及多样性，从 ［４－５］ 而影响植物自身生长 。因此，研究广藿香土壤微生物的 收稿日期：２０１４－０４－０８ 区系状况和变化是解决广藿香连作障碍的重要环节。传统的 基金项目：国家自然科学基金（编号；海南省中药现代化 分离鉴定法可培养土壤微生物的数量仅占总微生物数量的 专项资金（编号：２０１２ＺＹ０１５）。 ［６］ 作者简介：徐　岩（１９８８—），女，吉林白山人，硕士研究