实时荧光定量pr检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义的研究.pdf

实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义的研究 摘 要 大肠癌为常见多发的消化道恶性肿瘤，随着生活水平的提高和饮食习惯的改 变，大肠癌的人群患病率有所上升，并有年轻化趋向。大肠癌病人尽管接受了以 手术为主的根治术，但临床上仍有50％的大肠癌患者死于术后的肿瘤局部复发和 转移，成为手术治疗失败的主要原因。因此应用先进的分子生物学技术、建立定 量荧光RT—PCR方法检测大肠癌肿瘤标志物、术后转移的早期诊断受到高度重视。 本项研究应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞及探讨其I临床 意义。从2003年5月至2004年1月，收集在闩本爱知癌症中心手术8l例大肠癌 病例，应用随机引物和寡核苷酸引物，检测大肠癌病人手术腹腔冲洗液中游离细 (LightCycler)上进行定量分析。样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后 经过平均为1年的随访。研究结果表明：CEAmRNA和CK一20mRNA的阳性率和值 均与肿瘤的侵润度(T)，分期以及淋巴结转移相关。在～个合理界定值上，CEA和 cK20捻测的敏感度与特异度均为100％和100％。而常规的细胞学检杳则为：{‰丰11 100％。CEA或CK20的水平异常与大肠癌手术后无瘤生存率密切相关。通过实时荧 光定量PCR方法，测定腹腔冲洗液中CEA和CK20的值，显示出高于常规细胞学检 查的特异性和敏感性，是检测大肠癌腹腔微转移的有效方法。为I临床治疗大肠癌 分子水平的诊断、以及随后的对于具有高危因素病人的辅助化疗提供了一个新的 策略。 关键词：大肠癌，微转移，CEA，CK-20，实时荧光定量RT—PCR oF DETECTIoNDISSEMINA，rEDCANCERCELLSINTHE QUANTlTATIVE PERlToNEALC^MTYoFCoLoRECTALCARCINoMA PATlENTSWITH REAL-TIMERT．PCRANDlTSCLINICALSIGNlFICANCE ABSTRACT The ofthis istodetectthefreecancercellsin of purposestudy peritoneal cavity colorectalcancer by Real—timeRTPCRmethodand its patientsquantitative investigate clinical 2003to washwasobtained significance．FromMay Jan．2004，peritoneal from 81 withcolorectalcancerinAichicancercenter．eDNAwas from patients synthesized mRNAextractedfrom washes2kindsof and peritonealby primers(Random primer ofCEAandCK一20mRNAwas ona Oligoprimer)．Quantification performed ins