第六章酶的化学修饰资料.pptVIP

Enzyme Engineering酶工程 传统的生物催化剂都是设计或优化催化过程去适应已有的生物催化剂。 开始修饰或改造生物催化剂以适应特定的生物催化过程。希望能够实现先设计理想的催化过程，然后在寻找并改造得到理想的生物催化剂。 理想生物催化剂：有良好的实际应用灵活性、稳定性和可生产性。 第六章 酶分子化学修饰 一、酶分子修饰的原因 1． 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。 2． 作用的最适条件不符（温度、pH等）。 3． 酶的主要动力学性质的不适应。 4． 临床应用的特殊要求。 消除抗原性、延长酶的半衰期、稳定性等 二、 酶修饰的方向 1． 核酸水平（生物酶工程的内容） 通过基因工程方法改变编码酶分子的基因而达到改造酶的目的。 2． 蛋白质水平（化学修饰、定点突变等） 通过分子修饰的方法来改变已分离出来的天然酶的活性。 三、酶结构基础 1、酶的结构基础 辅因子 催化基团 全酶 接触残基 活性部位 底物结合基团 必需残基 辅助残基 酶蛋白 结构残基 非贡献残基 ?① 辅因子 FAD、FMN：脱氢酶、氧化酶的辅酶 NADH、NADPH：脱氢酶的辅酶 磷酸吡哆醛：转氨酶的辅基 Ca2+ ：?－淀粉酶金属离子辅因子： ?② 非贡献残基 木瓜蛋白酶 2/3，烯醇化酶 1/5 ③ 结构残基 结构残基在酶分子活性构象形成和稳定中起关键作用。 溶菌酶分子中有4对S－C键，分别在6-127,30-115,46-48,76-94位连接。实验证明这4对二硫键中，6-127位之间的键断裂，酶不失活。这表明酶分子中的S－S键并非全部为维持活性构象所必需。 ④ 催化基团（部位）是在催化反应中直接参与电子接受关系的部位。 牛胰凝乳蛋白酶Ser195，His57，ASP120 枯草杆菌蛋白酶，Ser221, His64, ASP32 ⑤ 底物结合部位：酶活性部位直接与其底物结合的残基构成的空间部位。 溶菌酶在水解细胞壁多糖的?－1,4糖苷键时，酶活性部位凹穴，能容纳6个六碳糖单位，即有六个结合亚位点，来识别这些糖单位。 ⑥ 辅助残基 黑曲霉产生淀粉酶 糖肽链有助于酶附着生淀粉 四、 酶化学修饰的基本原理 1． 如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性 修饰剂分子存在多个反应基团，可与酶形成多点交联。使酶的天然构象产生“刚性”结构。 2、如何保护酶活性部位与抗抑制剂 大分子修饰剂与酶结合后，产生的空间障碍或静电斥力阻挡抑制剂，“遮盖”了酶的活性部位。 第一节 酶分子化学修饰 一、定义： 修饰酶：通过各种方法使酶分子结构发生某些变化，从而改变酶的某些特性和功能的过程。 方法包括：物理的、化学的、生物学 物理法：吸附固定化、包埋固定化 高压修饰法、 变温诱导改性酶 三、酶分子化学修饰的形式 （一）酶的表面修饰：化学固定化；酶的小分子化学修饰作用；酶的大分子化学修饰；分子内交联；分子间交联；脂质体包裹；反相胶团微囊化 (二)酶分子的内部修饰：非催化活性基团的修饰；酶蛋白主链修饰；催化活性基团的修饰；肽链伸展后的修饰 （三）与辅因子相关的修饰：辅因子的共价结合；引入新的具有强反应的辅因子；金属酶的金属取代。 1.1 化学固定化： 通过酶表面的酸性或碱性氨基酸残基将酶共价连接到惰性载体上。 1.2 酶的小分子化学修饰作用 小分子化合物对酶活性部位或以外的侧链基团进行化学修饰，常用修饰剂有氨基葡萄糖、醋酸酐等。 例：马肝醇脱氢酶的Ly