局部亚低温对大全脑缺血再灌注损伤的影响.pdfVIP

中文摘要 局部亚低温对大鼠全脑缺血／再灌注损伤的影响 摘 要 目的：探讨局部亚低温对大鼠全脑缺血／再灌注损伤的 保护作用及其作用机制。 方法 l实验分组及动物模型的制备 32只sD雄性大鼠，体重200～250g(河北医科大学实验 动物中心提供)。随机分为4组，每组8只。假手术组(s组)： 分离并暴露双侧颈总动脉，开颅并暴露基底动脉第二无血管 区，仅穿线不阻断；缺血／再灌注组(I／R组)：采用3血管(双 侧颈总动脉和基底动脉)阻断法建立全脑缺血／再灌注损伤 模型，缺血10min，再灌注6h；亚低温组(H组)：再灌注 前即刻经股静脉缓慢注射10℃生理盐水3．5m1，结合头部冰 块降温，60w白炽灯照射身体，监测鼓膜温度和直肠温度。 再灌注前体温维持正常，再灌注后1min内鼓膜温度降至并 维持在32～34℃，直肠温度同时降低，20min左右升至并 h，3h后60w白炽灯照射 维持在37．5～38．7℃，低温维持3 身体缓慢复温；5一羟葵酸盐+亚低温组(5一HD+H组)：缺血 前30min腹腔内注射1 mg／ml线粒体ATP敏感性钾通道抑制 剂5一羟葵酸(5-HD)10mg／kg，其它3组腹腔内注射等容积 min 生理盐水。脑缺血前5min、脑缺血10min、再灌注后10 采集股动脉血检测动脉血氧分压和动脉血二氧化碳分压。 2标本的采集及检测方法 2．1大鼠血清SIOOB蛋白浓度的检测 中文摘要 于再灌注6h，水合氯醛腹腔注射再次麻醉大鼠，采集 颈内静脉血样2m1，于37．5。C恒温水箱中水浴30min后，以 min，取血清，置于液 半径8cm、以转速3500r／min离心10 氮罐中保存备用。严格按照大鼠血清S100B蛋白酶联免疫试 剂盒说明书的要求测定出各种浓度的标准品的吸光度，并绘 蛋白的吸光度，根据回归方程求得s100B蛋白浓度。 2．2大鼠脑水含量的测定 断头法处死大鼠，完整取出脑组织，去除中脑及脑桥， 留取左侧大脑组织，用滤纸吸干表面水份后置于干燥小瓶 24h烘干)、湿重法计 中，一20℃冰箱保存备用。用干(110。C 算脑水含量，作为脑水肿程度的判断。计算方法：脑水含量 (％)=(湿重一干重)／湿重×100％。 2．3大鼠脑组织匀浆MDA含量和SOD活性的测定 取右侧脑组织，一20。C冰箱保存。用PBS缓冲液制备10％ 脑组织匀浆，严格按照试剂盒说明书的要求采用硫代巴比妥 酸法和黄嘌呤氧化酶法测定脑组织匀浆MDA含量和SOD活 性。 2．4光镜观察皮质神经元的病理学改变 在冰盘上取右侧大脑额叶同一部位，切取厚度为3mill， mmX 面积5 5mm组织块，冷盐水冲洗干净后置于4％多聚甲 醛中摇匀，室温下过夜，在10x40光镜下观察皮质神经元的 病理学改变。 2．5透射电镜下观察皮质神经元线粒体的超微结构 右侧大脑半球额叶同一部位按照“快、小、轻、准”四 lmmX 字原则在冰盘上切取lmmX lmm的组织块。于4％戊二醛 中文摘要 固定液中，4C冰箱中保存。固定1h以上后送电镜实验室， 在透射电镜下观察皮质神经元线粒体的超微结构。 结果 1各组间体重、脑缺血前5min、脑缺血10 min、再灌注后 10min血气指标比较差异无统计学意义。 2各组间脑组织匀浆SOD活性的比较 S组SOD活性为68±lO U／mgprot；I／R组为29±6U／mg prot；H组为51±6U／mgprot；5-HD+H组为44±4