沙立度胺及与顺联合对hela细胞影响的研究.pdf

中文摘要 沙立度胺及与顺铂联合对Hela细胞影响的研究 摘 要 目的：宫颈癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤。近 年来化疗的地位不断提高，而化疗药物中的顺铂是首选，但 是大剂量化疗药物所带来的严重的副作用及耐药反应对化 疗的疗效构成挑战，减少化疗药物的用量及克服耐药将成为 提高进展型宫颈癌5年生存率的关键。因此，寻找增加化疗 药物的敏感性的途径就显的极其重要。 本实验采用IVITI法测定沙立度胺单独及与顺铂联合对 人宫颈癌Hela细胞体外生长的增殖抑制作用，采用流式细胞 仪分析对细胞周期、凋亡的影响，旨在进一步探讨沙立度胺 及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞株体外生长及对其凋亡、 细胞周期的影响，及采用免疫细胞化学法研究沙立度胺对 bcl．2蛋白的影响。为沙立度胺在宫颈癌治疗中的应用以及与 其它药物联合应用提供理论支持，为宫颈癌联合化疗开辟一 条新思路。 方法：1．研究对象：人宫颈癌Hela细胞株。2．MTT法 测定药物对Hela细胞生长的抑制率。分为4个试验组：(1) 对照组只加培养液。(2)沙立度胺组加入用培养液稀释 的终浓度为400mg／L、200mg／L、100mg／L、50mg／L、25 mg／L、6．25 mg／L、12．5 mg／L沙立度胺溶液。(3)顺铂组加 的顺铂溶液。(4)联合组加入用培养液稀释的终浓度为、 100 mg／L沙立度 mg／L、50mg／L、25mg／L、12．5mg／L、6．25 中文摘要 胺溶液和终浓度为2．5mg／L的顺铂溶液。每个浓度设置3个 复孔，48小时后测定吸光度值。试验重复3次。3．流式细 胞仪测定药物对细胞周期及凋亡的影响。采用100 mg／L、 50mg／L、6．25mg／L沙立度胺，联合组采用lmg／L的顺铂， 分组同上，48小时后用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡的影 响。试验重复4次。4．免疫细胞化学法测定沙立度胺对抑 凋亡基因bcl．2表达蛋白的影响。分为2组：(1)对照组只 加入培养液(2)沙立度胺组加入用培养液稀释的终浓度为 100 48小时 mg／L、50mg／L、6．25mg／L的沙立度胺溶液， 后，将盖玻片取出，用PBS液洗15分钟，丙酮固定10分钟， 4℃保存。按试剂盒说明进行操作，试验重复3次。 结果：1．MTT法测定药物对Hela细胞生长的抑制率。 (1)沙立度胺组各浓度抑制率分别于对照组比较，差异均有 显著性(p0．01)，表现为剂量依赖关系；试验组之间两两比 较，差异有显著性(p0．01)。(2)顺铂组各浓度抑制率于对照 组比较，差异有显著性(p0．01)，表现为剂量依赖关系；试 验组之间两两比较，差异有显著性(p0．01)。(3)联合组各浓 度抑制率与对照组比较，p0．01，差异有显著性，表现为剂 量依赖关系；试验组之间两两比较，p0．01，差异有显著性； 于单纯应用沙立度胺比较，p0．01，差异有显著性；与单纯 应用顺铂比较，6．25 mg／L沙立度胺联合顺铂组p0．05，其 余细胞抑制率均明显高于单纯应用顺铂组。2．流式细胞仪分 析药物对Hela细胞的细胞凋亡及周期的影响。(1)沙立度胺 组细胞凋亡率与对照组比较，p0．01，有统计学意义，且差 异有显著性，与沙立度胺浓度呈剂量依赖关系。各浓度沙立 度胺对G0和PI的影响，与对照组比较，p0．01，有统计学 中文摘要 意义，且差异有显著性。(2)顺铂组凋亡率与对照组比较， 各浓度顺铂对细胞周期影响，与对照组比较，p0．01，有统 计学意义，且差异有显著性，(3)联合组药物对凋亡率、Go／G。 和PI的影响与单独应用沙立度胺组及lmg／L顺铂组比较， p0．01，有统计学意义，且差异有显著性。3、免疫细胞化学 法对凋亡抑制基因bcl．2蛋白的检测。浓度