海南假单胞菌的病力及致病机理研究.pdf

中文摘要 海南假单胞菌的致病力及致病机理研究 摘 要 目的：2002年海南省人民医院谷海瀛教授从--NN炎患 者的痰中分离出1株假单胞新菌种，临床病例显示该菌的致 病力很强。谷海瀛教授将其命名为海南假单胞(Pseudomonas 接受号为AYl20881。该细菌是引起人类感染的第13个假单 胞新菌种。PH的16SrRNA进化亲缘关系树表明，该菌株属 于假单胞菌属，与铜绿假单胞菌(PA)的亲缘关系最为接近， 该菌株有荚膜，而荚膜可能是致病性较强的因素之一。然而， PH的致病性在现尚不清楚。为此，本研究通过动物实验， 建立铜绿假单胞菌与海南假单胞菌慢性感染的动物模型，使 其与常见的假单胞菌．铜绿假单胞菌进行致病力的比较。通过 检测肺泡灌注液(BALF)中白细胞数、中性粒细胞百分比、 细胞因子IL．113、IL．6、IL．8、TNF—a观测其炎症反应情况， 检测血清中金属基质蛋白酶2(MMP．2)反映肺纤维化的进 程，从而比较海南假单胞菌与铜绿假单胞菌在致病力方面的 差异，对于认识这一新菌种致病性有十分重要的意义，并且 为由该菌引起的其他病例的诊断和治疗提供了科学依据。 方法：1实验动物：雄性昆明小鼠，体重26．329，购自 海南省人民医院动物实验室。2建立支气管慢性感染的动物 模型：85只实验动物分为四组，A组经支气管接种无菌琼脂 糖珠悬液，B组经支气管接种富含铜绿假单胞菌琼脂糖珠悬 液，C组经支气管接种富含海南假单胞菌琼脂糖珠悬液，D 中文摘要 组作为健康对照组。3分别于接种后l天、2天、3天、5天、 7天将小鼠麻醉后，经心脏取血，收集血清用于细胞因子、 MMP-2和尿素等成分的检测；进行肺泡灌注，收集回收液， 进行细菌培养：计数WBC并分类；检测细胞因子、MMP．2， 并通过尿素稀释倍数校正。肺组织用来做病理检查。4统计 学分析：计量数据以均数±标准差表示，每组不同时间标本 检测结果的差异及组间差异用方差分析处理。P0，05有统计 学意义。所有数据均用EXEL及SAS8．0统计学软件包分析 处理。 结果：1肺泡灌注液细菌学检测：24只感染PA的小鼠 中有21只肺泡灌注液经培养分离出PA(感染率为87．5％)； 29只感染PH的小鼠中有26只肺泡灌注液经培养分离出PH (感染率为89．6％)。然而，仅有1只接种无菌琼脂的小鼠肺 中分离出细菌，余下阴性。5只未接种小鼠肺泡灌注液细菌 培养阴性。2肺泡灌注液中炎性介质水平：感染组(B组与 C组)与未感染组(A组)BALF中炎性蛋白介质水平有明 2-3天达到高峰，几 在接种PH1-2天达到高峰，在接种PA 乎所有细胞因子在接种7天后接近正常水平。血中未检测到 胞数量：接种PH组中性粒感染2天后百分比最高(大约91％ ±4．29％)，接种PA组中性粒感染3天后百分比最高(大约 87．4％±3．71％)，接种无菌琼脂小鼠中性粒l天最高(59％ ±7．6％)。中性粒在BLA中绝对数量显示，A组接种无菌琼 脂小鼠BLA中中性粒细胞绝对值1天后最高。B组峰值在感 中文摘要 峰值在感染PH后2天(835×106±97．5± 感染组(B组与C组)与未感染组(A组)血清中金属基质 组都是在第三天MMP．2水平达到峰值。5病理学：无菌组肺 病理反应为组织柔软、集中、单核细胞浸润，PA与PH感染 组在小血管和小支气管周围有中性粒细胞浸润，这种渗入有 些已经到达实质。 结论： l本实验成功建立了慢性海南假单胞菌的肺炎动 物模型，肺组织在感染的第1天即有炎性改变，大致7天恢 复正常。BALF中分离培养出海南假单胞菌，感染后7天内 一直存在。2海南假单胞菌引起炎症反应的峰值(1-2天)比 铜绿假单胞菌引起的炎症反应的峰值(2-3天)要早，即海 南假单胞菌所致病情进展较快，分析其原因，可能与海南假 单胞菌有外荚膜有关，我们对此将在以后的研究中进一步证 实。3海南假单胞菌引起炎症反应各项指标的峰值与铜绿假 单胞菌引起的炎症反应的峰值并无明显差异(P0．05)，提示 海南假单胞菌与常见的铜绿假单胞菌所致炎症反应程度大 致相当。4动物模型循环系统中检出金属基质蛋白酶 MMP．2，海南假单胞菌引起的感染组与铜绿