游离脂肪酸对hpg2肝细胞脂联素受体表达的影响.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 封窆呈： 日期： 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 0．：驴务 论文作者签名： 如～谚奠 指导教师签名： 垮 ，_～…一一～一一、 ；、一．中墅堕塑要一，； 游离脂肪酸对HepG2肝细胞脂 联素受体表达的影n向 目 的 质，它在血浆中有较高的浓度，约为5—30斗g／“，参加包括饮食摄入、糖代 谢、脂类代谢等相关的能量平衡调节，与肥胖，胰岛素抵抗(IR)，2型糖型尿 病、心血管疾病等有密切的相关性。肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病患者的 血浆脂联素水平明显下降。目前国际公认的测定胰岛素抵抗的”金标准” 高胰岛素正血糖钳夹实验(hyperinsulinemic—eu91ycemicclamp)发现，脂联 素水平与胰岛素作用的糖代谢呈正相关。脂联素基因在人类染色体上定位 于3q27，这一位点恰恰是糖尿病的敏感位点。本研究以HepG2肝细胞为研 究对象，用不同浓度的游离脂肪酸(free fattyacid，FFA)处理肝细胞，运用 RT—PCR方法观察肝细胞脂联素受体(R1／R2)的表达，探索脂联素受体是 否参与了高FFA诱导的胰岛素抵抗过程。 方 法 1．细胞培养与分组 100 PA；未加脂肪酸的设为对照组，继续培养24h。 2、脂联素受体的RT—PcR (1)细胞总RNA提取 将细胞加入1 离心15分钟；离心后取液相，移至另一新试管中，以0．5ml异丙醇沉淀 ．1， 75％乙醇洗涤，4℃、75009离心5分钟；室温空气干燥5分钟，重悬于 量，其余RNA样品分装于一70℃保存。 及0D280，0D260／OD280应大于1。8，方说明没有蛋白残余。 RNA浓度计算：RNA(斗g／斗1)=OD260×稀释倍数／1000 (2)一步法RT—PCR ． 按试剂盒说明加入反应体系。 利用特异性引物，以基因组RNA为模板，逆转录合成第一链cDNA，反 应条件为48℃、45Inin—国4℃、2min。 保存。 (3)琼脂糖凝胶电泳 制备用2％的琼脂糖凝胶，RT—PcR产物加上样缓冲液，混合后加入梳 子孔，140V电压条件下电泳40min，在溴酚蓝指示剂到达凝胶底部边缘时 min，自动电泳凝胶成 停止电泳。以溴化乙啶液(1¨∥肛1)覆盖凝胶，染色5 像分析仪下观察拍照。 3、统计学处理：采用stata7．O软件，结果以(叉±s)表示，采用t检验对 实验数据进行统计学处理，P0．05为差异有统计学意义，PO