下调ccno基表达对宫颈癌hela细胞生物学行为的影响.pdf

IUlI I UII II II IIII I IIl Y2818159 目录 摘要．………………………………………………………………………………………………………………………………．1 Abstract．．．．……．．．．．．．．．．．．．．．．…．．……．…………．．……………．．………．……………．………………．…．…．．…．．…………．：； 一、实验材料和仪器设备…………………………………………………………………………7 二、实验方法……………………………………………………………………………………10 三、实验结果……………………………………………………………………………………17 四、讨论…………………………………………………………………………………………21 五、结论…………………………………………………………………………………………27 综述………………………………………………………………………………………………34 英文缩略词表……………………………………………………………………………………48 致谢………………………………………………………………………………………………49 万方数据 摘要 背景：宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，居女性癌症患者死亡原因的第4位。 近年来发病率逐渐增高，尤其是发展中国家。除HPV感染外，宿主与细胞生长分 化相关的基因表达异常在宫颈癌的发病机制中同样具有重要作用。近年来，临床前 基础研究表明宫颈癌基因治疗是很有潜力的治疗手段，其中包括在细胞周期控制和 凋亡信号中具有重要作用的p53基因治疗、宫颈癌基因治疗中研究较多的Bax基因 治疗、HPVE2和p21基因以及针对癌基因的反义RNA技术治疗和宫颈癌治疗的理 想候选基因FHIT和PTEN基因的研究。我们课题组前期研究利用RNA．Seq技术， O在宫颈癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织， 发现细胞周期蛋白家族中的cyclin 提示其编码基因CCNO可能与宫颈癌的发生发展相关。 目的：研究下调CCNO基因表达对宫颈癌Hela细胞株体外增殖、细胞周期及凋亡 的影响，为研究宫颈癌生物治疗提供理论依据。 材料：病理组织切片来源于北京协和医学院妇产科宫颈癌患者，包括癌灶组织及癌 旁组织样本，剔除术前接受放射治疗、化学治疗以及未能获取满意存档石蜡组织标 本者； Hela细胞株，为人类宫颈腺癌细胞株，购自上海细胞库(TCHul87，中国上海 细胞典藏委员会)。 方祛 1．应用免疫荧光检测CCNO在宫颈癌组织中的表达情况； 颈癌Hela细胞株细胞中，沉默细胞内源性CCNO基因表达； 3．应用Western 被沉默，可用于后续实验； 4．应用CCK．8方法检测CCNO对宫颈癌细胞增殖的影响； 5．应用流式细胞分析技术检测CCNO对细胞周期转化、细胞凋亡的影响。 结果 1．免疫荧光检测宫颈癌中CCNO基因表达高于癌旁组织； 平； l 万方数据 h、96 3．在转染72 h后，CCK．8法显示CCNO—siRNA转染实验组生长速率明 显低于对照组，差异有统计学意义(P0．05，P0．01)； 5．细胞凋亡检测显示，Hela细胞转染CCNO．siRNA实验组较对照组凋亡细胞 增加约17％左右(P0．05)。 结论 1．CCNO在宫颈癌组织中的表达高于癌旁组织； 2．靶向CCNO—siRNA可抑制宫颈腺癌Hela细胞中内源性C