含pmlrar与abl双基因质粒标准品的制备及检测pmlrara基因的双重荧光定量pcr方法的建立.pdf

摘要 摘要 研究目的： 1．获得稳定，准确的含PML／RARa和ABL双基因质粒标准品 2．建立检测PML／RARa和ABL基因双重荧光定量PCR方法。 3．开发出可应用于临床急性早幼粒白血病病人PML／I{ARa基因检测试剂 盒。 方法： RARa中(该质粒Eh上海交通大学血液学研究所张小伟博士惠赠)送去测序。测序 性能进行评价。 2．构建稳定的检测PMI，／RARa和ABL基因的单重荧光定量PCR反应体系， 同时在此基础之上建立稳定双重荧光定量PCR方法，开发出可应用于临床检测 白血病病人PML／RARa检测的试剂盒。 实验结果： 1．成功构建了含PMI，依ARa和ABL双基因质粒标准品，用于白血病病人 PML／RARa基因的定量检测。 2．成功开发出用于临床检测白血病病人PML／RAIh基因的单重以及双重荧 光定量PCR反应试剂盒。 结论： 1．含PML瓜p幽和ABL双基因质粒标准品性质稳定，能用于白血病病人 PML／RARa基因的准确定量。 2．对检测PML／RARa基因的单重以及双重荧光定量PCR反应体系进行性能 评价，开发出了稳定的定量检测试剂盒。 关键词：荧光定量PCR；PML／RARa；ABL；急性早幼粒细胞白血病 I【 Abstract ABSTRACT Objective： 1、toconstructarecombinant and plasmidcontaining PML／RARa(L)fusiongene referenceABL． gene 2、constructionof real—time PCRmethodsto duplex quantitative detectPML／RA andABL Ra(L)fusiongene gene． 3、to aPML／RARafusiondetectionboxto develop gene reagent acute diagnosis leukemia． promyelocytis Methods： 1、TotalRNAwasextractedfromtheNB4 cells RT-PCR．Toclone using ABL intothe wasobtainedfrom gene plasmidPCMV4一PML／RARa(thisplamid Dr．Zhang XiaoweiwhoisfromInstituteof Jiao Hematology,Shanghai Tong therecombinantwas to the plasmidsubjectedsequencing．After