多效生长因子和管内皮细胞生长因子在椎间盘中的表达及意义的研究.pdf

·中文论著摘要· 多效生长因子和血管内皮细胞生长因子在 椎间盘中的表达及意义的研究 目 的 disc 椎间盘退变(intervertebral 并伴有进行性纤维化，表现为凝胶样髓核消失，髓核与纤维环原有清晰界限逐渐 消失，纤维环板层粗糙和纤维化，最后出现裂隙及老年色素沉积。研究证实椎间 盘的退变与椎间盘组织中酶系活性的改变和某些细胞因子的释放有关。多效生长 endothelial 因子(pleiotrophin，PTN)及血管内皮细胞生长因子(vasculargrowth factor，VEGF)是血管生成的重要刺激因子，在椎间盘退变中的作用仍不十分清楚， 本文研究不同月龄Wistar大鼠腰椎问盘形态学变化规律和其中PTN及VEGF含 量的变化情况，以阐明生理状态下大鼠腰椎间盘中PTN及VEGF表达的变化趋势， 进一步探讨PTN及VEGF与腰椎间盘退变的关系。 材料与方法 1、实验动物的分组及标本采集 健康Wistar大鼠共50只，雄性，体重不限，以月龄为单位，分为l、3、6、12 和18，5个实验组，每组10只。pA259／L戊巴比妥钠腹腔过量麻醉处死大鼠，每只大 鼠取第4、5腰椎间盘组织标本。第5腰椎间盘标本取出后经4％多聚甲醛溶液固 定，10％乙二胺四乙酸(EDTA)溶液脱钙，石蜡包埋，41．tm连续切片；第4腰椎间盘 标本置于．70C冰箱保存。 2、实验方法 (1)HE染色 二甲苯脱蜡一梯度酒精水化_苏木精．伊红染色_÷梯度酒精脱水_二甲苯透 明一树胶封片； (2)SABC免疫组织化学染色 脱蜡水化一3％过氧化氢(H202)抑制内源性过氧化物酶活性一热抗原修复 酒精分化_脱水透明_树胶封片；同时选用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性 对照。 (3)Western．blot免疫印迹染色 将组织碾碎_÷超声匀浆、离心，提取蛋白，蛋白定量，加样一SDS。PAGE凝 胶电泳_转膜一封闭、洗涤后在一抗溶液中4。C浸泡过夜_二抗溶液中室温下浸 泡2小时_÷洗涤液洗膜后染色至条带呈现，终止染色。同时选用13-actin作内参， PBS代替一抗作为阴性对照。 (4)结果判定 PTN及VEGF主要定位于细胞浆，以椎间盘细胞胞浆内出现棕黄色染色颗粒 定为阳性，按阳性细胞百分比进行分析。Western．blot试验结果条带用凝胶图象分 析系统进行灰度值分析。 (5)数据分析 数据资料以均数士标准差(i士s)表示，并采用SPSSl3．0统计分析软件进行方差 分析，PO．05为有统计学意义。 结果 1、HE染色结果 随着大鼠月龄的增加，椎间盘组织结构紊乱的程度逐渐加重，髓核内基质降 解、正中出现空腔，胶原纤维增生、粗大、排列紊乱、并可见纤维断裂或缺失。 2、PTN及VEGF的表达情况 随着大鼠月龄的增加(1．12月龄)，椎间盘组织细胞中PTN及VEGF的表达有逐 渐减低的趋势，但至18月龄，PTN及VEGF的表达又有所增加；6和12月龄组椎间盘 表达显著高于12月龄组俨O．01)。同月龄组椎间盘细胞中，PTN及VEGF在终板的 表达高于在髓核和纤维环中的表达(尸o．05)，髓核和纤维环中PTN及VEGF的表达 未见明显差异伊0．05)。部分标本细胞外基质中也可见PTN及VEGF阳性表达。 2 结论 1、大鼠椎间盘组织结构随着月龄增加逐渐发生退行性变： 2、PTN及VEGF参与了大鼠椎间盘的退变，并可能通过促进椎间盘组织中新 生血管的形成，延缓和修复椎间盘的退变。 关键词 多效生长因子；血管内皮细胞生长因子；椎间盘；退变；大鼠 3 ·英文论著摘要· and