大黄素对白血病胞k562、u937的增殖抑制及机制初探.pdf

中文摘要 大黄素对白血病细胞K562、U937的增殖 抑制及机制初探 摘 要 目的：白血病(Leukemia)是一类造血干细胞的克隆性疾 病，这些白血病细胞失去正常的成熟分化能力而停滞在细胞 发育的某一阶段，在骨髓和其他造血组织中白血病细胞大量 增殖聚集，并浸润其他组织器官，使正常造血功能受到抑制。 我国白血病的发病率约为2．76／10万。在恶性肿瘤所致的死 亡率中，白血病居第6位(男性)和第8位(女性)，但在 儿童则居第一位。尽管不断有新的化疗药物问世、并用于白 血病的治疗，造血干细胞移植技术也在不断提高，但目前仍 有许多自血病患者不能取得完全缓解或在完全缓解后复发。 原发或继发耐药及多药耐药的出现更增加了白血病治疗的 难度。因此，对于血液工作者而言，寻找新的有效治疗白血 病的药物和有效的治疗方案已经成为一项长期艰巨的任务。 具有抗炎抑菌、免疫调节、抗胰酶、保护肝肾功能、抗肿瘤 等生物活性，特别是大黄素的抗肿瘤作用，成为近年研究热 点。它通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、影响细 胞信号转导途径和影响细胞周期、逆转多药耐药等机制发挥 其抗肿瘤作用。 本文主要观察不同浓度的大黄素对白血病细胞株K562、 U937的增殖抑制作用，在细胞水平通过荧光显微镜和流式 细胞仪检测不同浓度大黄素对两种细胞的形态学、细胞周期 中文摘要 及凋亡率的影响，在分子水平上通过RT-PCR技术检测不同 浓度大黄素对两种细胞内bcl．2及NF．r．B基因表达的影响， 从而探讨大黄素抑制白血病细胞株K562、U937增殖的有关 机制。 方法： 1640 1细胞培养：将K562、U937细胞按常规用RPMI 饱和度5％C02环境下培养、传代，每2．3天传代一次。待细 胞进入对数生长期后进行实验。 2细胞增殖抑制实验：分别测定不同浓度大黄素对 的细胞加入不同浓度的大黄素，培养48小时后，加入CCK．8 试剂。在相同条件下继续培养4小时后，在450nm波长下检 测吸光度。根据吸光度(A值)计算细胞增殖抑制率。抑制 00％。 率(％)=(A对照组-A实验组)／A对照组×1 3荧光染色观察细胞形态改变：分别收集IC50浓度的大 33342 空白对照组。将细胞用PBS洗后重悬，加入Hochest 荧光试剂染色。置荧光显微镜下计数400个细胞，观察细胞 的形态学变化。 4流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡率：取对数生长 细胞，PBS再洗后加入RNA酶，10分钟后用终浓度为 min。流式细胞仪测定细胞周期，计算 50}tg／ml的PI染色30 中文摘要 细胞周期变化及凋亡率。 种于96孔板上。处理组的培养液中加入大黄素，使大黄素 养48h后，加入100I-tl 组细胞在405nm处的吸光度(A值)。 6 引物扩增目的基因，琼脂糖凝胶电泳后Goldview染色，以 13-action为内参，分析mRNA相对表达水平。 结果： 1大黄素能抑制K562、U937细胞生长并具有浓度依赖 IC50为48．00j．tmol／L。 2大黄素处理后，荧光显微镜下出现荧光标记的细胞增 多，呈现亮蓝色。 3流式细胞仪检测结果：大黄素处理后，K562细胞主要 表现为S期细胞增多、G0／G1期及G2／M期细胞减少 期及S期细胞减少(PO．05)。两种细胞的凋亡率也随浓度 的增加而增加(PO．05)。 性差异(P0．05)。 5 中文摘要 调。 结论：大黄素对K562细胞、U937细胞生长抑制作用明 显，可能通过下调bcl．2、NF．v．B的表达，使细胞周期进程被 阻滞，同时还促进肿瘤细胞发生凋亡。 白血病