大鼠卵巢组织冷保存和自体移植的研究.pdf

天津医科大学博十学位论艾 中文摘要 冻融卵巢移植技术是将获得的卵巢皮质切成片状，冷冻复苏后移植到受体一 定部位，诱发卵泡发育成熟。虽然卵巢组织的冷冻保存在近年取得了很大进展， 但该技术仍处于研究阶段，尚不能广泛应用于}‰床。如何提高冻融后卵巢组彭{颗 粒细胞的发育潜能，降低其凋亡的发生，促进卵巢血管生成斟予的生成以利于卵 泡存活和发育，是卵巢组织冻存和移植需要解决的问题。本研究以大鼠为动物模 型分三个部分对程序降温慢速冷冻法对卵巢原始、初级卵泡的影响以及促性腺激 用进行初步探讨。 第一部分程序降温冷冻和复苏对大鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡和卵巢组织 VEGFmRNA表达的影响 目的：通过观察冻融大鼠卵巢组织在体外培养中原始卵泡和初级卵泡的形态 以及卯母细胞和颗粒细胞凋亡情况，探讨冻融过程对原始卵泡和初级卵泡存活以 及VEGFmRNA表达的影响。 方法：将4-6周龄性未成熟的s．D雌性大鼠的新鲜卵巢组织和程序降温慢速 冷冻方法冻融后卵巢组织，作为新鲜组和冻融组，体外培养24小时作为新鲜培 养组和冻融培养组。HE染色，组织学观察卯泡形态；TUNEL方法检测卵泡凋亡： RT-PCR方法测定卵巢组织VEGFmRNA表达。 但形态正常的初级卵泡、次级卵泡和窦状卯泡百分率显著低于新鲜组(PO．01)。 冻融培养组与新鲜培养组4·I：1比，原始和初级卵泡形态正常酉分率都有显著下降 均高于新鲜组。经体外培养后，冻融卵巢原始卵泡和初级卯泡中卵母细胞和颗粒 卵巢组织原始卵泡凋亡=率耵7初级卵泡凋亡牢没有差异，但经体外培养后，凉融卵 巢原始卯池和初级卯泡凋亡率，以及卵母细胞和颗粒细胞凋亡率较新鲜培养纠织 揶有髭端：增加(P(0 01)。(4)培养24h后冻融卵巢绢织VEGJ；mRNA表达柏所 J、降。 结论：(1)冻融过程对原始卵泡和生长期卯泡都可造成一定程度的损伤，随 着卵泡发育阶段的增加，损伤的程度加重。(2)冻融过程诱导卵泡凋亡的发生， mRNA 捌亡町能是冷冻损伤的机制之一。(3)冻融过程可降低卵巢组织VEGF 的表达 第二部分卵泡刺激素FSH对体外培养中大鼠颗粒细胞凋亡和卵巢 组织VEGFmRNA表达的影响 目的：通过在培养液中添加卵泡刺激素FSH，探讨FSH对体外培养中大鼠 颗粒细胞凋亡和卵巢组织VEGFmRNA表达的影响。 方法：分别将新鲜卵巢和冻融卵巢卵泡颗粒细胞分离出来，体外培养4天， 浓度。在新鲜和冻融卵巢组织培养中对比培养液中添加FSif与未添加FSH条件下 卵巢组织VEGFmRNA的表达。 结果： 颗粒细胞分泌VEGF减少，无论是新鲜颗粒细胞还是冻融颗粒细胞，在培养液中 新鲜和冻融组卵巢组织VEGFmRNA表达增加(PO．05)。 和冻融卵泡分离的颗粒细胞分泌VEGF水平，提高体外培养新鲜和冻融卵巢组织 VEGFmRNA表达。 第三部分冻融大鼠卵巢组织白体移植的实验研究 目的：建立大鼠自体移植模型，探讨促性腙激素tGH对冻融卵巢移植卵血管 内皮生K因子VEGF、卵泡存活和发育的影响。 方法：将冻融卵巢组织自体移植回肌肉cIl预制的肉芽组织中，一组每日注射 FSH，另一组每日注刖生理盐水，观察两组卵巢l串卵泡数量和各级卵泡比例，以 及VEGFmRNA和PCNA表达。 结果：f 牙¨次级卵泡数晕比移植泣射*J?水纠¨田加l(P(0．0i)。f2)移枘后原始卵泡百分，爷 查婆竺型至兰堕!兰堡丝塞 注射盐水组相比，原始卵泡百分率也有下降，初级卵泡百分率有增加趋势。(3) 移植48h后，两个移植组VEGF 0天后，移植注射赫水纽VEGF 植注射盐水绢之间没有差别。移植1 mRNA水甲 级卵泡白分率较移植+盐水组高(P0．05)。 结论： (1)人鼠冻融卵巢组织白体移植中给予外源性FSH可增加移植卵巢 自体移植中给予外源性FSHrq’促进存活卵泡生长发育和卵泡分泌＆。 关键词：卵巢组织，冷冻保存，自体移植，凋亡，『f『