联合nk4基因单核细胞趋化蛋白-1(mcp-1)基因治疗胰腺癌的实验研究.pdf

联合NK4基因和单核细胞趋化蛋白．1(MCP—1)基因治疗 联合NK4基因和单核细胞趋化蛋白。l(MCP．1) 基因治疗胰腺癌的实验研究 研究生：周华平 导师：彭和平 中文摘要 研究背景胰腺癌是临床上难治性恶性肿瘤之一，其发病率有逐年上升的趋势。外 科手术是现阶段胰腺癌最为有效的治疗方式，但术后容易复发和转移，而且70％一90％ 的病人确诊时已丧失根治手术的时机，5年牛存率依然小于5％。因此，积极寻求新 的治疗措施，提高胰腺癌的综合治疗水平是面待解决的重要课题。 随着分子生物学、免疫学对肿瘤发生、发展和转移机制研究的不断深入和交叉 渗透，以免疫学原理为基础、分子牛物学技术为方法建立起来的肿瘤免疫基因治疗 (1mmunogenetherapy)为胰腺癌的治疗提供了新的希望。然而现己报道的大多数肿 瘤临床基因治疗方案中，绝大多数方案采用单一抗肿瘤的目的基因，而单基因治疗 肿瘤疗效大多不甚理想，局限性大，相比之下，多基因联合治疗具有更大的合理性 与优越性，是肿瘤基因治疗发展的必然方向。肿瘤发生及演进是涉及多基因的复杂 过程，而单一抗肿瘤基因作用不强大且有限，往往难以有效抑制肿瘤细胞增殖。因 此，利用两种或多种基因联合治疗肿瘤，可充分发挥抗肿瘤基因间相互协同作用， 显著增强抗肿瘤基因治疗的效果。 Growth a (Hepatocyte Factor,SF)，是来源于问质细胞的多功能细胞因子，在肿瘤细胞的粘附、基质降解、 侵袭及转移过程中起重要的作用。HGF通过激活其特异性受体c．Met，从而促进多 种肿瘤细胞的运动、侵袭、基质的降解和诱导新生血管形成，导致肿瘤的发牛和转 3 联合NK4基冈和单核细胞趋化蛋白．1(MCP．1)基因治疗 移。研究表明HGF／c．Met信号转导途径与胰腺癌细胞的恶性度有关，胰腺癌细胞有 c．Met的过度表达，而胰腺癌组织中的成纤维细胞则通过旁分泌的形式分泌HGF， 诱导c-Met的酪氨酸磷酸化，刺激胰腺癌的生长、浸润和转移【21。HGF通过其受体 c．Met的激活，在调节肿瘤侵袭和转移以及血管形成中具有重要作用。因此NK4不 仅是HGF的拮抗剂，也是血管生成的抑制剂。阻断HGF／c—Met途径和肿瘤血管牛成 胰腺癌的牛物学行为，抑制胰腺癌的生长、侵袭和转移。Murakami掣5J的实验在裸 鼠模型上发现NK4能够抑制胰腺癌的肝转移，此外，研究还发现NK4是血管形成 的抑制剂，可以抑制肝细胞牛长因子、碱性成纤维细胞牛长因子、血管内皮细胞生 长因子所诱导的血管形成作用161。 单核细胞趋化蛋白．1(MCP．1)是趋化因子超家族CC亚族中对单核细胞趋化活 性最强的趋化因子，MCP．1在体内的抗肿瘤效应已经在一些动物实验中被证实。 MCP．1能够通过T细胞依赖的和非T细胞依赖的方式来抑制肿瘤的牛长171。Monti 等f8j的研究发现MCP．1在胰腺癌的演进中起负性调节作用，他们发现胰腺癌患者 MCP．1的水平明显高于正常人，而且血浆中MCP．1水平高的胰腺癌手术切除患者比 水平低的患者有更好的预后。血浆MCP—l的浓度和肿瘤巨噬细胞的浸润呈正相关， 而与肿瘤的增殖活动呈负相关。迸一步的研究发现其机制是通过诱导单核巨噬细胞 在肿瘤内浸润(intra-tumoralinfiltration)来抑制肿瘤的生长和转移的。 本课题以制备的分别携带NK4和MCP．1基因的两种重组腺病毒为基础，在体 外条件下用两种重组腺病毒联合感染胰腺癌细胞SWl990，使NK4基因及MCP．1基 疗胰腺癌的可行性及可能机制，为进一步临床应用联合NK4和MCP．1基因治疗胰 腺癌奠定基础 目的扩增、纯化重组NK4及重组MCP—l腺病毒，在体外条件下联合两种重组腺 病毒感染胰腺癌细胞SWl990，将NK4基因及MCP—l基因导入胰腺癌细胞，使其表 达并分泌NK4和MCP．1蛋白。检测基因表达对肿瘤细胞和血管内皮细胞的影响探 讨联合NK4和MCP．1基因基因治疗胰腺癌的可行性及可能机制。为进一步临床应 用联合NK4和MCP．1基因治疗胰腺癌奠定基础。 方法I．将NK4及MC