肝细胞生长因子高血压心肌纤维化中的作用及其机制的研究.pdfVIP

肝细胞生长因子在高血压心肌纤维化中的作用 及其机制的研究 摘 要 研究背景与目的 高血压靶器官损害是高血压致死致残的主要原因。心室重构是高血 压最主要的靶器官损害之一。心肌纤维化是其中重要的病理改变，表现 为心肌正常组织结构中胶原纤维过量积聚、心脏组织中胶原浓度显著升 高或胶原成分发生改变，Ⅰ型胶原比例增加，从而使心肌僵硬度增加、 顺应性降低、左室舒张功能减退。纤维化机制复杂，由多个系统参与调 节。心脏局部的肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system ，RAS ） 和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）/c-Met 系统是调节 心肌胶原的沉积和降解的重要因素。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ， Ang Ⅱ）是RAS 主要的效应分子，是重要的促纤维化因子。HGF 是一种 多功能生长因子，有促有丝分裂、细胞迁移和细胞形态发生的作用，能 促进血管生成、抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌纤维化，是心血管系统的 保护因子，与高血压及心肌纤维化密切相关。近年来屡见报道 HGF 在心 肌缺血、心肌病等病理模型中具抑制纤维化的作用，但对于其对原发性 高血压所致的心肌纤维化的作用及与 RAS 的关系的研究很少，也未见关 于 HGF 对心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFbs ）Ⅰ型胶原合成的 影响及其机制的研究。本研究拟探讨高血压心肌纤维化病程中 HGF 的作 用，及其对 CFbs 胶原合成的影响及机制。 方法 1. 以自发性高血压大鼠（spontaneous hypertension rat，SHR ）为高血压 心肌纤维化模型，WKY 为对照。取 8 周、12 周、16 周、24 周、32 周雄性 WKY 和 SHR 大鼠各 3 只，处死后取心脏组织制成石蜡切片。 另取 4 周龄、16 周龄 SHR 大鼠各 6 只，分别随机分成用药组和对照 组，用药组给予每千克体重 20mg 洛沙坦灌胃，一天一次。4 周龄大 鼠处理至 16 周，16 周龄大鼠处理至 32 周后处死取心脏制成石蜡切 片，分别代表早期和晚期治疗。利用麦松（masson ）三色法检测心肌 胶原含量，免疫组织化学方法检测心肌组织 HGF 含量。利用 Leica Qwin 彩色图象分析系统分析以上 masson 染色及免疫组化图片，计算 心肌胶原容积分数（collagen volume fraction，CVF ）及HGF 含量。 CVF=胶原面积/全视野组织面积，即胶原组织所占面积百分比；HGF 含量=HGF 阳性面积百分比×平均灰度值，阳性面积百分比即阳性斑 块面积占全视野组织面积百分比。通过比较各组 CVF、HGF 含量变 化，观察高血压心肌纤维化病程的发生发展及 RAS 与 HGF 在此病程 中的作用。 -9 -8 -7 -6 -5 2. 原代培养SD大鼠心肌成纤维细胞，用 10 、10 、10 、10 、10 mol/L Ang Ⅱ分别孵育48h ，以四氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium ，MTT ） 比色法方法检测细胞增殖，评价Ang Ⅱ对CFbs增殖的影响；用 20ng/ml -7 mol/L Ang Ⅱ共同孵育CFbs 24h、48h ，以MTT方法检测细 HGF和 10 胞增殖，评价HGF对Ang Ⅱ诱导的CFbs增殖的影响。 -9 -8 -7 -6 -5 3. 原代培养SD大鼠心肌成纤维细胞，用 10 、10 、10 、10 、10 mol/L A