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腺病毒载体介导肝细胞生长因子对放射性心脏损伤的基因治疗 l{J文摘要 腺病毒载体介导肝细胞生长因子对放射性心脏损伤的基因治疗 专 业：内科学(心血管内科) 博士研究生：胡舜英 导 师：陈国伟教授 中文摘要 inducedheartdisease，RIHD与心脏临近部位的肿 放射性心脏病(irradiation 瘤如淋巴瘤、乳腺癌、食道癌、胸腺瘤及肺癌等放疗有关，可以波及到心包膜、 心肌、心脏传导系统及冠状动脉等，随着肿瘤放化疗综合治疗技术的进步和临床 疗效的提高，一些肿瘤如何杰金氏淋巴瘤的、早期乳腺癌等患者可以获得长期生 存，放射治疗所致的远期心脏并发症可能成为患者放疗后死亡的主要原因。 在放射性心脏病机理的研究中，倾向认为毛细血管内皮细胞是射线损伤的靶 细胞，心肌细胞的变性及心肌纤维化是继发于内皮细胞受损后心脏微循环障碍所 致，其治疗应该包括保护内皮细胞、促进血管新生、减少心肌细胞变性坏死、抑 制纤维化等。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)是一种可以作 用于多种组织与细胞的生长因子，具有促进细胞增殖、细胞运动、形态发生、血 管新生、抑制凋亡和抗纤维化等作用，为此我们开展了HGF基因治疗放射性心脏 损伤的研究，同时我们研究了重组人HGF对体外培养的心肌细胞和血管内皮细胞 放射性损伤的保护作用，为放射性心脏损伤的防治提供实验基础。 利用胰酶消化和差速贴壁的方法，我们分离纯化了大鼠乳鼠的心肌细胞，观 察了H)CoY射线照射对心肌细胞活性、凋亡及蛋白合成的影响及人重组HGF在 其中的作用，发现60Co．r射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞，降低体外培养的 Y 心肌细胞活性，促进心肌细胞凋亡，抑制心肌细胞蛋白合成，HGF能减轻COCo 射线对心肌细胞活性及蛋白合成的抑制作用，减少细胞凋亡。同时，我们观察了 60CoY射线照射对人ECV304脐静脉血管内皮细胞活性及迁移能力的影响及HGF 腺病毒载体介导盯细胞生长因子对放射性心脏损伤的基冈治疗 中文摘要 对内皮细胞放射性损伤的保护作用，发现60CoY射线照射抑制内皮细胞活性及迁 移能力，HGF可以明显血管内皮细胞的迁移作用，并可以减轻∞CoY射线照射对 内皮细胞活性及迁移能力的抑制作用，改善内皮细胞的迁移能力。上述结果说明， flGF对体外培养的心肌细胞及内皮细胞的放射性损伤有保护作用。 在本研究中，我们采用60coY射线20Gy单剂量心脏局部照射建立了大鼠放 射性心脏损伤模型。在照射后120天，采用RTMCE检测左室前壁心肌微循环灌 注的变化。结果显示照射组大鼠左室前壁的e值较对照组明显降低，说明照射组 大鼠左室的心肌微循环血流灌注较对照组差，证实照射可以降低心肌血流灌注。 脏左心室功能，照射组大鼠LVSP、d蝉t．。、dp／dtmm均较未照射组明显减低，说 明60COy射线局部照射导致大鼠心脏收缩及舒张功能下降，取大鼠心脏病理切片 HE染色发现照射组大鼠心脏出现弥散的局灶性的心肌细胞变性、纤维组织增生、 纤维斑块形成、血管壁增厚坏死、血管腔阻塞等病理改变。 基于HGF在心血管疾病中的保护作用，本研究在建立了放射性心脏损伤的大 鼠模型的基础上，采用基因治疗的方法，用腺病毒载体介导肝细胞生长因子 (Ad-HGF)治疗放射性心脏损伤，观察HGF对放射性心脏损伤的作用。照射后 contrasteehocardio 180天，采用实时心肌超声造影(real—timemyocardial 组大鼠左室前壁的IB值较其他照射组明显升高，说明Ad．HGF治疗组大鼠左室的 心肌微循环血流灌注较未治疗组明显改善；用Langgendorff离体心脏灌流装置检 其他照射组明显升高。说明Ad-HGF可以改善放射性心脏损伤大鼠的心脏功能； 取心脏组织病理切片天狼猩红染色，发现照射大鼠局灶性纤维组织明显增生， Ad．HGF治疗组的胶原纤维沉积较未治