自噬与wntβcatenin通路在耐顺铂肺癌a549细胞中的关系.pdf

自噬在系统性炎症所致黑质多巴胺神经元损伤中的作用及机制研究 中文摘要 中文摘要 第一部分：系统性炎症导致黑质多巴胺神经元慢性、进行性缺失 和α-synuclein 病理性蓄积 目的：建立系统性炎症诱导的PD 小鼠模型，研究系统性炎症对黑质多巴胺神 经元的慢性损伤作用和α-synuclein 降解的影响。 方法： 选取 3、16 月龄 C57BL 雄性小鼠作为年轻和老龄小鼠，单次腹腔注 射细菌脂多糖（LPS, 5mg/kg ），进行爬杆试验和步距测试的运动功能检测；免疫组 化法观察黑质多巴胺神经元数量、小胶质细胞活化状态变化和IL-1β 的阳性表达， 免疫印迹法检测腹侧中脑 （黑质）α-synuclein 蛋白表达水平；聚合酶链式反应法 检测α-synuclein 转录水平。 结果：与正常对照组比较，16 月龄小鼠于LPS 注射后4-5m 开始出现运动功 能障碍，随时间延长进一步加剧，而 3 月龄组出现较晚，延迟至 LPS 注射后 7m * 才出现（P0.05 ）；LPS 注射后1d-7m 整个观察期内，两个年龄组小鼠黑质部位小 胶质细胞数量明显增加，同时IL-1β 阳性表达明显增加，16 月龄组的变化更显著； LPS 注射后5m，16 月龄组小鼠黑质多巴胺神经元数量出现减少 （27% ），7m 时进 一步降低（41% ），3 月龄组延迟至 LPS 注射后 7m，开始出现减少（22% ）；LPS 注射后 1d-7m 整个观察期内两个年龄组小鼠腹侧中脑（黑质部位）α-synuclein 蛋 ** 白表达水平均显著增加（ P0.01 ），同期α-synuclein 转录水平无显著变化。 结论：通过单次腹腔注射细菌脂多糖可成功建立PD 模型，小鼠黑质部位出现 持续性神经炎症，多巴胺神经元慢性、进行性缺失，以及 α-synuclein 长期病理性 蓄积。 关键词：LPS ；小胶质细胞；多巴胺神经元；α-synuclein I 中文摘要 自噬在系统性炎症所致黑质多巴胺神经元损伤中的作用及机制研究 第二部分：系统性炎症导致中脑黑质自噬活性改变和多巴胺神经 元自噬功能障碍 目的：利用第一部分建立的PD 模型，研究PD 发病过程中黑质部位自噬活性 变化。 方法：选取3、16 月龄的C57BL 雄性小鼠作为年轻和老龄小鼠，细菌脂多糖 （LPS ，5mg/kg ）单次腹腔注射制作PD 模型，免疫印迹法检测腹侧中脑 （黑质） LC3- Ⅱ、p62 和HDAC6 蛋白表达水平；透射电镜观察黑质神经元超微结构，免疫 荧光共聚焦技术观察多巴胺神经元内LC3 、p62 的表达。离体实验中，以不同浓度 TNF-a 处理低分化PC12 细胞，MTT 方法检测细胞存活率；免疫印迹法检测LC3- Ⅱ、p62 和 a-synuclein 蛋白表达水平，聚合酶链式反应法检测p62 和 a-synuclein 转录水平。 结果：与正常对照组比较，LPS 注射后 1d-7m 两个年龄组小鼠腹侧中脑 （黑 ** 质）均出现p62 蛋白表达增加（ P0.01 ）； LC3- Ⅱ和HDAC6 蛋白表达量均出现 ** 先增加后减少的动态变化（P0.01 ），与3 月龄比较，16 月龄组LC3- Ⅱ和HDAC6 蛋白表达下降更早出现；与正常对照组比较，LPS 注射后 1d，黑质神经元内可见 双层膜结构的自噬体；而且多巴胺神经元出现LC3 和p62 的阳性表达；离体实验 ** 结果表明，TNF-α 呈浓度依赖性地降低PC12 细胞存活率（ P0.01 ）；TNF-α (50 ng/ml) 处理 24h ，PC12 细胞内 α-synuclein 、LC3- Ⅱ和 p62 蛋白