自噬抑制氟诱导成骨细胞mc3t3-e1凋亡作用分析.pdfVIP

·中文论著摘要· 自噬抑制氟诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡 作用分析 目的 本实验主要研究氟诱导成骨细胞MC3T3-E1发生自噬、凋亡，及两者之间的关 系。通过给予MC3T3-E1细胞不同浓度的氟，探讨氟引起凋亡的具体的浓度，并 在研究氟对凋亡的过程中能够研究是否存在自噬，及自噬对凋亡的影响。 材料和方法 1．利用MTT比色法检测氟对成骨细胞MC3T3．E1的增殖活性影响，探寻氟引起 凋亡的浓度。 MC3T3．E1细胞接种于96孔培养板，每孔0．1ml培养基，24h后细胞贴壁， 更换培养液，分别加入不同浓度的氟化钠，复合培养24，48小时后。加入MTT， 酶标仪测量490rim波长的吸光度值(OD)。分析细胞的增殖和凋亡情况。 2．流式细胞术检测细胞凋亡。 避光孵育lO分钟后，上机检测。 3．western blot免疫印记技术检测凋亡相关蛋白。 加入蛋白裂解液裂解。收集蛋白样品后测定蛋白样品的浓度，加入适量的上 样缓冲液，煮沸5分钟后，冷却到室温后就可以上样，将样品加入到SDS．PAGE 加样空内以恒压80v跑电泳90．120分钟，电泳后转到PVDF膜上，采用恒流 300mA转膜2小时，封闭两小时后，用相应抗体孵育过夜，第二日清晨加入对 应的辣根过氧化物酶标记的二抗孵育2小时，最后采用ECL试剂来检测。利用 westernblot免疫印记技术检测Beclin1蛋白及LC3蛋白表达水平及变化。 实验结果 1．氟能明显抑制成骨细胞MC3T3-E1增殖，诱发细胞凋亡。其抑制作用呈时间、 剂量依赖性。 2．氟在促进细胞凋亡的同时也促进自噬产生。 3．3-MA抑制自噬后，氟诱导的凋亡进一步增多。 结论 1．氟明显抑制MC3T3．E1细胞增殖，同时诱发细胞凋亡和自噬。 2．氟诱导的自噬部分拮抗其诱导的凋亡。 关键词 氟；凋亡；自噬；成骨细胞；MC3T3．E1 2 ·英文论著摘要· inhibits Autophagy inMC3T3--E1cells apoptosis ective Obj To Fluorine-inducedand ofMC3T3一E1cells autophagy explore apoptosis andthe betweenthem． relationship Methods fluoridethatcausedcell 1 1．To theconcentrationof explore apoptosis，MC3T3一E cell wasassessedMTT vitality by assay； tre were at MC3T3-E1cellsandthecellswere platedseeding Briefly，cells atedwithfluoride