自分泌vegf人非小细胞肺癌细胞系a549作用的实验研究.pdfVIP

中文摘要 目的。 肺癌是胸外科的常见疾病，发病率和死亡率在世界范围内都位于前列。由于缺 乏特异的临床症状和肿瘤标记物，肺癌的早期诊断困难，总体治疗效果较差，已成 为严重威胁健康的的疾病。血管内皮生长因子(VEGF)是血小板衍生因子(PDGF) 超基因家族成员之一，是一种胞浆分泌蛋白。现有研究结果表明，VEGF在q114,细 胞肺癌细胞和组织中高表达，促进血管上皮细胞及淋巴管上皮细胞的增殖和分裂， 在肺癌发展和转移过程中起到了关键作用。也有研究观察到，VEGF对肺癌细胞的 白分泌作用，可能促进肿瘤的生长增殖，但是具体的作用机制还不清楚，相关的研 究也还很少。本研究旨在从基凶合成环节入手，通过用VEGF的反义寡核苷酸转染 体外无血管环境培养的非小细胞肺癌细胞系A549，观察反义寡核苷酸(ASODN) 脂质体转染的效果，进一步研究VEGF反义寡核苷酸对细胞中VEGF的抑制作用和 抑制表达后对细胞生物学特性的影响，以初步揭示VEGF自分泌与旁分泌对肺癌细 胞的不同影响，阐明其潜在的治疗价值。 方法： 体外培养非小细胞肺癌细胞系A549，并用荧光标记的VEGF反义寡核苷酸以 不同方式转染A549，用荧光显微镜观察转染效果。再用五种不同方式转染A549细 胞，分为五组：实验组以反义寡核苷酸(ASODN)转染细胞，两个核苷酸对照组 法检测不同方式转染后A549VEGFmRNA与VEGF蛋白表达情况的变化：用MTT 法观察不同组细胞的生长存活情况；流式细胞仪检测不同组细胞周期的变化。 结果： 上的转染效率，而不加脂质体的寡核苷酸组仅有5％左右的转染效率；(2)实验组 转染ASODN24h、48h后，细胞中VEGFmRNA显著低于其余四个对照组(P0．05)； 均有明显降低(P0．001)。两个核苷酸对照组的VEGF蛋白的表达与两个空白对 照组相比也有降低(P0．05)：脂质体空转染组与培养基组相比无明显差异(P0．05)。 (4)在导入核苷酸后的第l天，ASODN组的肺癌细胞存活数明显低于四个对照组， (P0．05)，第2天以后与两个核苷酸对照组相比差异不明显，与脂质体组和培养基 3 其余四组。 结论： (1)ASODN与脂质体共转染方式可以被肺癌细胞高效率摄取，并能在细胞核 和细胞质之间内获得高效率的扩散。(2)反义VEGF寡核苷酸可以有效抑制非小细 胞肺癌A549细胞VEGFmRNA和蛋白的表达。(3)在没有血管和内皮细胞因素的 参与下，抑制肺癌细胞内源性VEGF的表达可以抑制细胞的生长和增殖。正义VEGF 寡核苷酸与错义VEGF寡核苷酸也可以在一定程度上抑制A549细胞的生长和增殖。 苷酸脂质体共转染方式可以特异高效地从基因层面降低肺癌VEGF的表达，抑制细 胞生长，具有临床应用前景。(6)非小细胞肺癌VEGF自分泌与远距内分泌对肿瘤 细胞的生长具有不同影响，进一步区分有可能E,厶匕I=Jl巴更特异地阻断肿瘤发展过程中的关 键环节，以减少治疗中所发生的副作用。 关键词： 非小细胞肺癌，血管内皮生长因子，反义寡核苷酸，内源性，自分泌 4 Abstract objective： canceristhemostcommon diseaseinthoracic Lung malignant surgery,which remainsa health of and major problemhighmorbiditymortalityworldwide．Early is therewereno or difficult,as clinical tumormarkers． diagnosis specific symptoms of cancerisstill Vascular Growth Endothelial Prognosislung