骨肉瘤组织硒含测定及硒甲基硒代半胱氨酸诱导骨肉瘤细胞系mg-63凋亡的实验研究.pdfVIP

骨肉瘤组织硒含量测定及硒甲基硒代半胱氨酸诱导 骨肉瘤细胞系MG-63凋亡的实验研究 专 业：外科学 硕士生：雍碧城 导 师：黄纲副主任医师 中山大学附属第一医院骨肿瘤科 中文摘要 目的 第一部分：研究骨肉瘤组织中硒含量。第二部分：研究硒甲基硒代半胱氨 酸(MSC)对人骨肉瘤细胞系MG一63的增殖抑制和凋亡诱导作用。 材料和方法 第一部分：收集8例骨肉瘤和10例非骨肉瘤的全血标本及14例骨肉瘤组 织和该患者自身正常骨组织，采用氢化物原子荧光光谱法测定血液和组织中硒元 素含量。 第二部分：利用WST-I法检测硒甲基硒代半胱氨酸(MSC)单独及联合盐酸 吡柔比星对MG一63细胞的增殖抑制作用。倒置显微镜下观察MSC对MG一63细胞的 形态学影响。Hoechst33342／PI双染在荧光显微镜下观察MG一63细胞在不同浓 度的MSC作用下凋亡的形态学变化。流式细胞仪检测MSC对MG一63的细胞周期的 制蛋白Bcl-2表达。 结果 第一部分： 异(PO．01)。 第二部分： u u 1．在不同浓度MSC(6．25umol／L，12．5umol／L，25mol／L，50mol／L， 75 umol／L，100|l 细胞生长抑制呈浓度依赖性。 1．t 2．用50mol／L 有统计学差异，提示MSC对MG-63细胞生长抑制呈时间依赖性。 3．倒置显微镜下观察：MSC作用后，MG一63细胞变圆，细胞间距逐渐增大， 变圆的细胞数量增多，可见到大部分细胞凋亡特征性的形态学变化，细胞皱缩，核 固缩碎裂并有凋亡小体形成。50umol／L 双染，荧光显微镜下观察到蓝染细胞增加明显而红染细胞增加不明显，呈低红高 蓝，为凋亡的细胞图像。 1．t 4．流式细胞仪检测：MG-63细胞经50mol／LMSC处理48小时后，在周期 图上G。期出现明显的亚二倍峰；72小时后亚二倍峰变宽，结果显示MSC能诱导 MG一63细胞凋亡。50Ilmol／LMSC处理48h、72h后处于的Go／G。期细胞分别为 细胞所占比例增加，而处于S期、G：／M期的细胞所占比例减少，提示MG一63细胞 被阻断在Go／G。期。 5．O、50llmol／L、100umol／LMSC处理MG-63细胞24h后酶标法检测 II umol／L 组相比，50mol／L、100 别增加了(53．8％±3．23)％，(72．9±2．03)％，结果有统计学意义。 II ±2．09)％，提示MSC可能通过内源性线粒体途径诱导M6-63凋亡。 IJ 6．单独使用盐酸吡柔比星(THP)15 g／m1处理48h后，WST一1法检测MG一63 la 的细胞生长抑制率为(16．68±5．39)％。MSC50mol／L预处理细胞24h，换液后 15u 用THP ％，结果有统计学差异，提示MSC与THP联合作用较THP单独对MG一63的抑制作 用更为明显。 结论 1．骨肉瘤组织中硒含量明显高于自身正常骨组织，提示骨肉瘤的发生可能与硒 含量有关。 2．硒甲基硒代半胱氨酸对骨肉瘤细胞系MG-63具有增殖抑制和凋亡诱导作用， 并且呈时间和剂量依赖，其机制可能为凋亡抑制蛋白Bcl-2下调，启动内源性线 粒体通路，激活凋亡执行蛋白Caspase一3，诱导凋亡。 3．硒甲基硒代半胱氨酸与盐酸吡柔比星协同抑制骨肉瘤细胞MG一63增殖，提示 MSC可望成为骨肉瘤化疗的辅助药物。 关键词：骨肉瘤，硒，硒甲基硒代半胱氨酸，凋亡 Primaryonseleniumlevelinhuman st