鼻咽腔降温对大全脑缺血再灌注损伤的保护作用.pdf

中文摘要 鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用 摘 要 目的：采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠全脑缺血． 再灌注损伤模型，比较全身降温和鼻咽腔降温对降低海马温 度速度的影响，通过观察缺血及再灌注期间海马CAl区细胞 外液谷氨酸(Glutamic 关凋亡基因的表达，探讨鼻咽腔降温法对大鼠全脑缺血再灌 注损伤的保护作用。 方法： 1实验分组及动物模型制备 学实验动物中心提供)。随机分为3组(每组6只)，常温组 位固定于实验台上，于颈后正中第一、二颈椎处切开皮肤，剥 离显露双侧翼小孔，烧灼两侧的椎动脉使其闭塞，24h后再 用同法麻醉动物，气管插管吸氧自主呼吸。股静脉切开置管 以lml／h的速度输入乳酸钠林格氏液。作颈前正中切开皮肤， 分离出双侧颈总动脉，用4-0丝线穿过颈总动脉备用，部分 缝合颈部伤口。动物立体固定后，头皮刺入电极，持续监测 脑电图(EEG)，四肢皮下刺入电极，持续监测心电图(ECG)。 切开头皮，用微型颅钻分别在左右海马CAl区(前囟 的圆孔，将微透析探针刺入左侧海马CAl区2mm，用乳酸 中文摘要 电图波形稳定后收集脑组织透析液，间隔时间为10min，直 至再灌注后2h。右侧海马CAl区置入微型温度探头监测海 马温度。室温保持在25℃。之后按照实验分组给予不同的处 理。常温组(A组)：整个实验过程中保持大鼠直肠和海马温 降温组(B组)：应用电扇、冰袋和酒精等使海马温度降至 33℃后再夹闭双侧颈总动脉20min。鼻咽腔降温组(C组)： 将气管插管的大鼠咽喉下部置一棉团和吸引设备避免误吸。 两侧鼻腔插入自制硅胶管，深度5mm，持续注入5℃生理盐 水，速度为1 用变温毯和白炽灯复温至37．0±O．5℃。以上各组均同时监测 直肠温度并维持在37+0．5℃。 ． 2标本的采集及检测方法 2．1微透析液的收集及测定 微透析液收集后保存在．70℃。利用高效毛细管电泳法测 定出各种浓度的谷氨酸标准品的峰面积，并绘制标准曲线、 求得回归方程。利用该方法测出每个样品中谷氨酸的峰面 积，根据回归方程求得谷氨酸的浓度。 2．2Bcl．2、Bax表达的检测 大鼠脑缺血再灌注8h后深麻醉沿肋缘剪开胸廓暴露升 主动脉和心脏，提起心尖剪开左心室，插灌注针至升主动脉 同时剪开右心耳并推注固定液将全身固定。固定完毕后断 头，剥开颅骨取出全脑，取海马所在的节段区放入4％多聚 中文摘要 甲醛溶液中固定。Bcl．2、Bax免疫组化测定采用SP法，按 照试剂盒的要求步骤依次进行。 结果： l各组间大鼠的体重比较无统计学差异。 2降温速度比较 组为6．5±0．7min，前者是后者的4．8倍。 3缺血前各组间海马CAl区[Glu]e比较无统计学差异 (PO．05)。 4缺血中各组间海马CAl区[Glu]e比较 5再灌注后10min、20min、30min时， B组、C组[Glu]。比A 组明显降低(Po．05)；B组、C组之间比较无统计学差异 (PO．05)。其余时间点两两比较无统计学差异。 6各组内海马CAl区[Glu]e恢复至缺血前水平的时间： 间分别为40min、20min、20min。 7各组海马CAl区Bax表达的比较 与A组比较，B组与C组的Bax免疫阳性细胞数及灰度值显 著减少减小(pO．05)，B组与C组比较无统计学差异。 8各组海马CAl区Bcl．2表达的比较 与A组比较，B组与C组的Bcl．2免疫阳性细胞数及灰度值显 著增多增大(pO．05)，B组与C组比较无统计学差异。 中文摘要 结论： l鼻咽腔降温与全身降温同样具有脑保护作用，均能抑制缺 血再灌注时脑细胞外谷氨酸的升高，减弱Bax的表达，增强 Bcl．2的表达。 2鼻咽腔降温法降低海马温度的速度明显快于全身降法，前 者约为后者的5倍。 关键词：鼻咽腔降温；脑缺血再灌注损伤；凋亡；微透 析；毛细管电泳；Bcl．2；Bax