sdf-1-ccr4通路在视网膜前体细胞迁移中作用的研究.pdfVIP

迁移中作用的研究 专 业： 眼科学 博士生： 赖平红 导 师： 唐仕波教授 中山大学中山眼科中心 中文摘要 视网膜神经元变性是视网膜色素变性、老年黄斑变性、视网膜 脱离等常见眼病造成视力损害的原因。移植体外培养的神经干，前 体细胞到病变损害的视网膜，取代变性的视网膜神经元，是治疗这 一类型视网膜病变的有希望的途径之一。移植的神经干，前体细胞 发挥功能的前提是移植细胞能够从移植部位迁移到病变或损伤的 部位。譬如，移植到玻璃体腔的神经干细胞必须能够从玻璃体腔向 视网膜内迁移，并且穿透视网膜组织的各个屏障，比如内界膜，才 有可能到达病变部位，与视网膜神经元建立结构和功能上的联系， 整合到视网膜神经元环路，进而进一步分化为成熟神经元并发挥功 能。近年来研究表明，神经干，前体细胞移植到大鼠玻璃体腔或视 网膜下腔后，能够准确地迁移到遭受病变损伤的部位。 Grozdanic SD等把成年海马回神经干，前体细胞移植到新生或成年大鼠眼玻璃 体腔，发现移植细胞能够存活一定的时间并且一部份细胞能整合到 宿主视网膜的板层结构。然而，同时又发现，神经干，前体细胞移 植到成年动物眼内时，只有在视网膜病变或受到损伤时，才出现广 泛的迁移和整合。这些研究提示，病变或损伤组织可能生成了某些 细胞因子，为外来的神经干前体细胞迁移到病变部位提供了某种 “信号”，引导供体细胞向病变组织迁移。但损伤组织产生的这种 指导移植细胞向病变部位迁移的细胞因子的性质是什么目前尚不 清楚。 在损伤组织分泌的多种细胞因子中，基质细胞衍生因子 (stromaIceIls—derivedfacto r，SDF．1)目前被认为是最有可能引 导干细胞迁移的一个。SDF．1最先被发现是白细胞、造血细胞及血 管内皮细胞的趋化剂，最近的研究发现SDF．1在调控胚胎发育过程 中神经干，前体的迁移以及肿瘤细胞的转移中也起着至关重要的作 用。为了证明SDF．1一CXCR4功能轴是否参与了指导移植细胞向受 体视网膜病变部位迁移这一过程，本实验检测了SDF．1在三种损伤 机理截然不同的视网膜损伤模型中的表达与时空分布特点。同时， 为了证明SDF一1发挥作用的另一基础，即CXR4(SDF一1的唯一受体) 是否存在于供体细胞，我们检测了体外扩增的视网膜前体细胞上 CXCR4的表达情况，并且检查SDF-1对视网膜前体细胞的体外趋化 作用。本研究证实，视网膜在经受各种不同的损伤，病变时均产生 炎症趋化因子SDF．1．但在不同的损伤模型中有不同的时空表达特 征。同时，体外扩增的视网膜前体细胞表达SDF-1的受体CXCR4， 并且对SDF．1的趋化反应能力呈剂量依赖关系。这些实验说明， SDF一1．CXCR4通路是指导移植细胞向病变部位迁移的途径之一。 实验进一步证实，视网膜前体细胞在02诱导下CXCR4受体表达增 加，提示视网膜前体细胞移植到体内后对SDF-1的趋化能力可能增 强。 本研究分为以下四个部份： 第一部分SDF一1在损伤／病变的视网膜上的表达研究 目的：探讨SDF．1在急性损伤和遗传性视网膜变性损伤大鼠视网膜 上的表达及时空分布特征。 方法： 60天S．D大鼠37只，随机分为缺血再灌注组(16只)、N一 rosou rea，MNU)损伤组(16只)、 甲基．N．亚硝脲(N．methyl．N．nit 立MNU诱导的大鼠视网膜损伤模型。缺血-再灌注损伤组前房 110mmHG静水压持续60分钟建立视网膜急性缺血一再灌注损伤大 d，3d、5d和7d后取材，缺血再灌注损伤 鼠模型。MNU损伤模型1 大鼠再灌注后6小时、12小时、24小时和48d,时取材。遗传性视网 照。末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL) 染色检测不同时间点模型鼠凋亡细胞的分布。RT—PCR检测以上各 时间点视网膜组织SDF-1和低氧诱导因子(HYpoxia induced．factor．…F．1)mRNA的表达，免疫组织化学法检测SDFl 蛋白在视网膜的表达。