低频超声终止妊的实验研究.pdf

华中科技大学同济医学院 博士研究生论文 中文摘要 低频超声终止妊娠的实验研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科 博士研究生：李晓艳 博士导师：王泽华教授 kHZ) 目的探讨低频超声终止早期妊娠的可能性。利用低频聚焦超声(353 直接照射兔早孕胚胎，观察其抗孕有效性，检测有效抗孕声功率；同时观察低频 聚焦超声有效抗孕声功率直接辐射兔胚胎后不同时间胎盘及子宫光镜和电镜下 的形态学改变、胎盘组织细胞凋亡的变化和凋亡调控基因Fas、Fasl．、p53、Bax 和Bcl一2表达的改变，以期为l晦床研究提供重要的实验依据。 方法 1．将妊娠第10d摸胎确诊孕兔随机分成6组，孕兔麻醉后开腹，置双侧子 宫于腹壁上，选取左侧子宫的全部着床胚胎为实验组，右侧为自身对照，分别用 s、35 s、40W／cm2 353kHZ低频聚焦超声声功率30Wflcm2×60W／cm2×60 X60s、45 s、50W／cm2X60 55W／c舒×60 W／c砰X60 s汞J s直接辐照胚 d(照后第10d)，再次开腹，肉眼 胎着床点，照射后关腹继续饲养至妊娠第20 观察子宫内胚胎的发育情况，计算出对照组和实验组胚胎的死亡率，即照射后第 10d子宫内已死亡(包括已流产和死胎)的胚胎数与该侧照射前的胚胎数相比。 2．将妊娠第10d摸胎确诊孕兔随机分成6组，孕兔麻醉后开腹，置双侧子 d、20 宫于腹壁上，将对照组妊娠第10 d各3只动物和353kHZ低频聚焦超声 6种声功率辐照组照后即刻(妊娠第10d)、照后10d(妊娠第20d)各10只 动物的部分胚胎取出，选取胎盘组织，生理盐水冲净血液后，一部分组织置4％ h，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察胎盘(子 多聚甲醛溶液中固定24 宫底蜕膜和绒毛)及子宫的组织学变化情况；另一部分组织置2．5％戊二醛溶 本课题受湖北省讣生委科研基金资助(GS2003—05) 华中科技大学同济医学院 博士研究生论文 液中前固定2h以上，常规电镜包埋、超薄切片，H600型透射电镜观察胎盘及 子宫的超微结构的改变。 3．妊娠第10d摸胎确诊孕兔对照组胚胎(右侧子宫胚胎为自身对照)不照 kHZ 射，实验组(左侧子宫胚胎)选用已证实为完全终止孕兔早孕声功率(353 w／cm2X60 d和照射后24、 低频聚焦超声40 s)辐照胚胎，留取正常妊娠第10 48、72、96、120、168、192h的胎盘组织，生理盐水洗净血液后置4％多聚甲 醛中固定，常规石蜡包埋、切片，末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEI。 reaction)技术观察胎盘组织细胞的凋亡情况。 kHZ低频聚焦 4．免疫组织化学(immunohistochemistry)技术检测353 20、168、192 超声40W／cm2X60S辐照胚胎后24、48、72、96、1 h胎盘组织 细胞Fas、FasL、Bax和Bcl2蛋白的表达改变。 5．原位杂交(Insire kIIZ低频聚焦超声40