食品中大肠杆菌O157：H7检测的研究.pfg.pdfVIP

15 食品中肠出血性大肠杆菌0 7：H7的检测研究 摘要 l 肠出血性大肠杆菌O57：H7是近年来新发现的严重危害人类生 命安全的食源性病原微生物。课题通过对食品中大肠杆菌O157：H7 1 究，为大肠杆菌O57：H7的防治工作以及食品安全检测提供技术支 撑。 微生物选择性培养及鉴定方法检测食品中大肠杆菌O157：H7。 以食品中常见的普通大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及四联球菌为对 照，再进行生理生化试验及凝集试验鉴定，并用这一方法对模拟样 1 品进行检验。结果显示大肠杆菌O57：H7在这两种培养基上呈无色 菌落，普通大肠杆菌呈粉红色菌落，其它菌均未生长；所用大肠杆 1 1 菌057：H7符合该菌的典型生理生化特性，且能与抗O57鼠单抗及 H7血清发生凝集反应：牛奶、牛肉及鸡肉模拟样品14h增菌后，用 该法的最低检出限约为100cfu／25ml(g)样品。 鸡卵黄抗体的制备与酶标。水洗释法制备特异性鸡抗大肠杆菌 O15 1 57：H7 7：H7脂多糖抗体(Anti．0 LPS．IgY，简称鸡卵黄抗体 IgY)，纯化的IgY的纯度在82％以上，效价为1：l600(起始浓度为 l PEAG电泳结果显示其纯度较高。 l57鼠单抗 建立双抗夹心ELISA检测方法。分别以IgY和抗0 2．5la l57 检测抗体HRP．IgY为1：160，包被抗体IgY为1g／ml，抗O 1 鼠单抗为l：800；两种检测方法对大肠杆菌O57：H7纯培养物检测的 最低检出限都为l 模拟牛奶、牛肉和鸡肉样品进行检测，样品经14h增菌后其最低检 l 样品、2．5cfu／259样品，应用抗O 品、5cfu／259样品、2．5cfu／25g样品。 建立PCR检测方法来检查食品模拟样品。结果PCR最优反应体系为 61．t 51．t M、退火温度50。C、循环次数30 模板含量0．1 g、引物浓度1 1 03cfu／ml， 次，用此法检测大肠杆菌O57：H7纯培养的最低检出限为1 对普通大肠杆菌无非特异性反应；食品模拟(牛奶)样品经14h增 菌后的最低检出限为2．5cfu／25ml样品。 高于微生物选择性培养检测方法；微生物选择性培养方法的灵敏度 较低，且比较费时，但是可靠性高，常作为前两种检测方法最终判 定的标准方法。 关键词：大肠杆菌0157：H7，食源性病原菌检测，微生物选择性培 ’ 养，双抗夹心ELISA，PCR ll StudiesonDetectionofE．coli0157：H7inFood ABSTRACT E．coli0l57：H7whichwasdiscoveredinrecentisafood ithadthreatenedhealthand pathogenicmicroorganism．And people’S life