三羟异黄酮诱导肝癌细胞smmc-7721凋亡的分子机制研究.pdf

中文 摘 要 三轻异黄酮诱导人肝癌细胞SMMC-7721 凋亡的分子机制研究 摘 要 原发性肝癌是全球发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤 之一，在我国已成为第二大癌症杀手。近年来肝癌的发病率 有逐步上升趋势，严重威胁着人民的健康和生命。肝癌的发 生是涉及多因素、多步骤、进行性发展的复杂过程，受环境 和遗传等多重因素的影响。当前手术治疗仍然占据主导地 位，但由于肝癌多合并肝硬化和早期肝内转移，手术治疗切 除率低且复发率高，另外由于肝癌患者对毒副反应大的化疗 药物耐受力差，因此从天然动植物中寻找毒性低、疗效高的 抗癌活性成分成为近年来国内外肝癌治疗研究的热点。 三轻异黄酮是大豆中具有高效低毒特性的抗癌活性成 份，广泛存在于大豆、水果和其他植物中。流行病学调查发 现，高消耗大豆的亚洲居民的性激素相关肿瘤如乳腺癌、前 列腺癌等的发病率较西方国家低。进一步的研究证实，大豆 中的三经异黄酮作为一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂和植物雌 激素，可抑制多种肿瘤如乳癌、前列腺癌、胃癌、结肠癌等 的生一长，其可能的抗癌机理包括:弱的雌激素样作用及拮抗 雌激素作用;诱导肿瘤细胞的凋亡;调节细胞周期，使细胞 阻滞于Gz/M期;抑制酪氨酸蛋白激酶的活性和抑制各种生 长因子及其受体的磷酸化;增强抗氧化酶的活性，抑制过氧 化氢的生成;抑制DNA拓扑异构酶11的活性;抑制肿瘤的 血管形成和转移;抑制肿瘤对某些化疗药物的耐药等。其中 一 一 一 1 中文 摘 要 诱导肿瘤细胞的凋亡是其主要作用机制。 众所周知，细胞凋亡在肝癌的发生发展中发挥重要作 用，细胞凋亡是基因调控下的细胞主动死亡过程，可引起 DNA损伤、有丝分裂纺锤体功能紊乱、代谢失调等口形态 上主要表现为细胞皱缩、胞浆减少、核碎裂、凋亡小体形成 等，细胞的基因组DNA被分解成180-200bp的规则片段， 凝胶电泳可出现特征性的梯状条带。细胞凋亡存在复杂的调 节网络，有许多基因和信号蛋白分子参与了细胞凋亡的调控 过程，如Fas/FasL、胞浆信号转导蛋白、Caspases家族和 Bcl-2家族等。死亡受体Fas为一种I型膜表面糖膜蛋白， 当受到外源性信号刺激后，与细胞表面的FasL结合，使细 胞具有很强的诱导凋亡作用。Bcl-2家族是细胞凋亡的重要 调解者，系通过阻断凋亡的公共信号传递通路而诱导凋亡。 p53是重要的抑癌基因，与细胞周期的调控和凋亡的调控密 切相关，p53可对损伤的DNA进行修复，如修复失败则诱 导损伤细胞发生凋亡，从而防止肿瘤的发生，而p53突变后 则失去抑制细胞增殖、启动肿瘤细胞凋亡的作用，与肝癌等 多种肿瘤的发生关系密切。生存素Survivin是近来发现的细 胞凋亡抑制基因，在几乎所有恶性肿瘤中均有高表达，而在 分化良好的正常组织却无表达，Survivin具有抑制细胞凋亡 和影响细胞分裂的双重作用，研究认为Survivin在肝癌中的 高表达与其凋亡受阻有关。Caspase-3在细胞凋亡过程中是 非常关键的效应分子，通过级联反应最终降解底物，促使细 胞凋亡。 基于以上理论，诱导癌细胞凋亡成为肝癌治疗的新途 径。早期的研究发现三轻异黄酮能诱导白血病细胞的凋亡， 中 文 摘 要 进一步的体外研究证实三经异黄酮能使多种肿瘤细胞受阻 于G2/M期，诱导癌细胞的凋亡，伴随凋亡相关基因Bel-2 家族、Fas,p53,环氧合酶COX-2、细胞周期负性调节因 子p21等的改变，但其具体的作用靶点和分子机制尚未完全 阐明。 目前，国内外关于三轻异黄酮对肝癌的抑制作用研究尚 乏报道，通过细胞培养发现其可诱导肝癌细胞凋亡，但其诱 导凋亡的分子机制尚未明了。本研究通过体外细胞培养和分 子生物学技术，检测人肝癌细胞SMMC-7721凋亡过程中相 关蛋白基因的表达，旨在探讨三轻异黄酮诱导肝癌细胞凋亡 的分子机制。 目的:探讨三轻异黄酮诱导人肝癌细胞SMMC-77